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家蚕丝腺是昆虫中蛋白质合成能力最强的生物器官，能在相当短的时间内高效表达合成蚕丝蛋白，是研究基因时空特异性表达调控机制的理想材料。蚕丝蛋白由丝素和丝胶2部分组成，其表达合成过程有众多基因和相关调节因子的参与。直接编码丝素蛋白的基因有fib-L、fib-H和P25共3个，已被深入研究。已经分离克隆的编码丝胶蛋白的基因有Ser1、Ser2、S3、S4和S5共5个。其他一些与蚕丝蛋白合成相关的基因和调节因子主要有：SGF-B、BmFA、Ub2a和Ub2b复合体、TRIO复合体和PSGF调节蛋白等丝腺特异转录因子，tRNAAla、tRNALy5、tRNAGlu、tRNAPhe和tRNAGly等tRNA基因及其转录因子TFⅢR，真核翻译延长因子Ⅰ和其他一些特异调节因子。这些基因和相关因子的发现为阐明蚕丝蛋白的表达调控机制作了很好的尝试，但由于这一机制的复杂性，仍有许多未明之处有待继续深入研究。 为进一步阐明蚕丝蛋白的表达调控机制，在家蚕基因组和大量EST数据分析的基础上，本论文选择了可能参与蚕丝蛋白合成过程的2个基因Bmtdh和Bmsps1，对它们进行了克隆和序列分析，用RT-PCR试验分析了它们的时空表达特性，并在大肠杆菌中尝试了Bmsps1基因的诱导表达，获得结果如下： 1．Bmtdh基因的序列和结构 Bmtdh基因编码家蚕的苏氨酸脱氢酶（TDH酶），克隆的该基因cDNA长1310bp（登录号：ABA43639.1），包括227bp 5′-UTR序列，在基因组中单拷贝存在。其外显子有3个，其中Extron 1长333bp，位于Scaffold006584上：Extron 2和Extron3长度分别为791bp和186bp，均位于Scaffold003119上。第2内含子长1365bp，位于Scaffold003119上；第1内含子因跨2个Scaffold而不能确定。其ORF长1026bp，编码342个氨基酸，预测其蛋白质的分子量为39.1kDa，含有4个Cys，可形成2个二硫键，等电点为8.69。 2．Bmtdh基因的保守功能域和系统进化分析 Bmtdh基因的推导氨基酸序列含有一个完整的表面异构酶功能域(Ile29-Val322，)，具有NAD+结合特性，说明Bmtdh基因的编码蛋白具有表面异构酶活性。比较家蚕与其他物种TDH酶的同源性表明，其与果蝇、按蚊和蜜蜂的相似性分别为90％、91％和88％，与家猪和小鼠的相似分别为77％和75％，而与大肠杆菌的相似性仅为41％。利用包括家蚕在内的33个物种的TDH酶氨基酸序列构建的系统进化树，能很好地反映这些物种在进化上的亲缘关系。 3．Bmtdh基因的RT-PCR分析 对5龄3天6个组织的RT-PCR试验发现，Bmtdh基因在家蚕的丝腺和卵巢中的转录水平都很高，在中肠、血液、脂肪体、马氏管4个组织中的转录水平较低，这与EST数据的分析结果基本相同。11个不同发育时期的RT-PCR试验表明，Bmtdh基因在4龄眠期、5龄1天和5龄3天三个发育时期的丝腺中转录水平都很高，而在