耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌同源性分析及耐药机制的研究

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目的:1.监测贵州医科大学附属医院(下面简称―我院‖)耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(Carbapenem-resistance Acinetobacter baumannii,CRAB)的同源性,了解CRAB的流行病学特征。2.用实时荧光定量PCR检测对碳青霉烯类抗生素耐药和敏感的鲍曼不动杆菌外膜通道蛋白CarO和外排泵AdeB的mRNA表达情况,探讨CarO蛋白和外排泵AdeB在介导我院鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药中的作用。  方法:1.收集我院2011年7月至2012年8月临床分离的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌100株以及2015年7月至2015年9月临床分离的对碳青霉烯酶类抗生素耐药和敏感鲍曼不动杆菌各20株,采用扩增性核糖体DNA限制性酶切片段分析(amplifiedribosomal DNA restriction analysis,ARDRA)对收集的鲍曼不动杆菌进行分子分型,以确定其为鲍曼不动杆菌,用于同源性及耐药机制的研究。2.取收集于2011年7月至2012年8月经ARDRA鉴定确定为耐药鲍曼不动杆菌的菌株,采用肠杆菌科重复基因保守序列(enterbacterial repetitive intergenic consensus ERIC)PCR进行同源性分析。3.取2015年7月至9月收集的经ARDRA鉴定确定为鲍曼不动杆菌的菌株,采用实时荧光定量PCR检测其外膜蛋白CarO和外排泵基因AdeB的mRNA表达水平。  结果:1.经ARDRA分子分型,收集于2011年7月至2012年8月临床分离的100株耐药菌株有90株确定为鲍曼不动杆菌,收集于2015年7月至9月临床分离的耐药和敏感菌株均确定为鲍曼不动杆菌。2.经ERIC-PCR基因分型,我院临床分离的CRAB分为A、B、C、D、E、F6型,其中A型65株,B型19株,C型3株,D型2株,E、F型各1株。3.经实时荧光定量PCR检测我院分离的鲍曼不动杆菌耐药菌株外膜蛋白 CarO的 mRNA表达量明显低于敏感菌株,而耐药菌株外排泵 AdeB的mRNA表达量要高于敏感菌株(P<0.01)。  结论:鲍曼不动杆菌在医院内存在部分克隆株散在传播情况,以 ICU病房最为严重,应该积极采取有效防范措施,防止院内交叉感染的发生。外膜蛋白CarO和外排泵基因AdeB广泛存在于鲍曼不动杆菌,外膜通道蛋白CarO的缺失或表达量降低和外排泵AdeB的高度表达是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制。
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