迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是一种对水产养殖业极具危害的致病菌,其致病过程是一系列致病基因时空顺序表达的结果。EsrA-EsrB双组分系统对该菌的毒力机制具有中枢性的调节作用,其中EsrB是响应调控元件,主要通过对Ⅲ型分泌系统(T3SS)和VI型分泌系统(T6SS)以及溶血素EthA的调控作用来实现对宿主的入侵和致病过程。研究野生型和各种突变型EsrB对这些毒力因子的差异性调控,将有助于更深入地理解迟钝爱德华氏菌的致病机制和毒力调控网络,为研发高侵染性、低毒力的新型疫苗打下基础。本文通过易错PCR对esrB基因进行随机突变,得到了突变位点具有随机性和分散性特点的esrB突变体。将这些突变基因导入AesrB中获得了一系列esrB基因替代菌株。本文结合溶血活性检测以及ELISA实验对T3SS和T6SS分泌蛋白的检测结果,最终筛选出两株侵染能力增强、毒力蛋白分泌能力减弱的菌株,即15号和47号,并通过测序确定了突变位点。同时构建了T6SS的无标记框内缺失突变株ΔT6SS,并在实验室已有的ΔT3ss基础上筛选获得了AT3SS/AT6SS。本文进一步对野生株EIB202. AesrB以及上述菌株进行了包括致病能力、感染动力学、胞外蛋白谱、部分致病基因的转录水平、巨噬细胞内存活复制能力等在内的多项表型检测,发现T3SS和T6SS在迟钝爱德华氏菌致病过程中都发挥了重要的作用,但T3SS的贡献要大于T6SS。AesrB与AT3SS/AT6SS在巨噬细胞内定殖行为具有显著差异,进一步表明esrB的功能不仅仅局限于对T3SS和T6SS的调控作用,还调节EthA等与侵染相关的毒力因子。结合同源建模和各项表型实验的结果,15号和47号产生异于野生株EIB202和AesrB的表型,是其esrB启动子区域和ORF内部碱基突变的综合结果。