目的：丙型肝炎病毒（HCV）感染后易转为慢性肝炎，且与肝硬化、肝癌关系密切，目前尚无有效的特异性防治手段。有研究表明，以T细胞表位为基础的HCV疫苗免疫黑猩猩后可以预防多个型别的HCV感染，我们从HCV-C、NS3、NS4和NS5中筛选了几个优势T细胞表位，制备了一种HCV-T重组蛋白抗原（简称T蛋白），免疫小鼠诱导了CTL应答。除了细胞免疫之外，体液免疫对HCV感染也有一定的预防作用。本课题组从我国流行的HCV型别中筛选了几个有代表性的、具有高交叉保护性的E2-HVR1序列进行组合，研制了一种重组嵌和抗原F4HVR1（简称F蛋白），该抗原对我国的HCV流行株具有高度的交叉保护性。HCV-E1（简称E蛋白）是本课题组制备的另一种基于6个有代表性亚型的E1 B细胞表位的重组抗原，初步研究结果表明，该蛋白能够诱导强烈的体液免疫应答。　　 本研究将T、F以及E蛋白联合和分别免疫BALB/c小鼠，研究其免疫原性、预防和治疗作用；将Al（OH）3佐剂和弗氏佐剂分别与上述三种蛋白混合接种于BALB/c小鼠，研究其增强疫苗免疫效果的作用。　　 方法：　　 1.丙型肝炎病毒重组蛋白联合疫苗的免疫保护性研究　　 1.1动物免疫：将6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为7组，每组11只，分别为①PBS组、②T+F+E组、③T+F组、④T+E组、⑤T组、⑥F组、⑦E组，皮下多点注射免疫，佐剂用氢氧化铝（v/v：20％），每3周免疫一次，共免疫3次。　　 1.2体液免疫检测：每次免疫后20天和末次免疫后14天取血，分离血清，用间接ELISA检测抗体效价。　　 1.3细胞免疫检测：末次免疫后14天，每组处死5只小鼠，取脾脏分离脾细胞。ELISPOT法检测分泌IL-4和IFN-γ的淋巴细胞水平；LDH法检测特异性CTL杀伤活性；流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T细胞的百分率。　　 1.4免疫小鼠对皮下移植瘤攻击的抑瘤作用：将每组剩余的小鼠于末次免疫后14天皮下种植1.0×106个SP2/0-NS3细胞，观察免疫小鼠对HCV感染细胞在体内的杀伤作用。　　 1.5丙型肝炎病毒重组蛋白治疗作用：另取6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为5组，每组5只，先在背部皮下注射1.0×106个SP2/0-NS3细胞，7天后接种PBS、T+F+E、T+F、T+E、T，每2周1次，共3次。　　 2.Al（OH）3和弗氏佐剂增强丙肝重组蛋白联合疫苗免疫效果的研究　　 分别用PBS、T+F+E、T+F+E+Al（OH）3、T+F+E+弗氏佐剂，皮下免疫BALB/c小鼠，每2周一次，共免疫3次。用上述方法检测体液免疫和细胞免疫应答水平以及免疫小鼠对皮下移植瘤攻击的抑瘤作用。　　 结果：　　 1.丙型肝炎病毒重组蛋白联合疫苗的免疫保护性研究　　 1.1体液免疫：与PBS组相比，第三次免疫后各组均产生了特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体（P<0.05），各组之间F蛋白和E蛋白特异性IgG1抗体效价无显著差异（P>0.05）。T+E组E蛋白特异性IgG2a抗体效价显著高于T+F+E组和E组（P<0.05）。结果表明T蛋白的引入不影响F和E蛋白诱导体液免疫的强度和特异性，另外，T与E蛋白联合免疫后可增强E蛋白的Th1应答。　　 1.2分泌IL-4和IFN-γ的淋巴细胞水平：T+F+E、T+F和T+E组均显著高于T、F、E和PBS组（p<0.05），表明联合免疫诱导了高水平的Th1和Th2应答。　　 1.3特异性CTL杀伤活性：T+F+E、T+F和T+E所诱导的NS3特异性CTL水平显著高于T组（p<0.05），T+F+E组、T+F组和T+E组之间无显著差异（P>0.05），表明F和/或E蛋白与T蛋白联合免疫增强了T蛋白所诱导的CTL应答。　　 1.4 CD4+T和CD8+T细胞：各组CD4+T和CD8+T细胞的百分率均高于PBS组（p<0.05），说明蛋白免疫后刺激了CD4+T和CD8+T细胞的增殖。　　 1.5免疫小鼠对皮下移植瘤攻击的抑瘤作用：T+F+E、T+F、T+E和T组60天生存率为100％，PBS组仅为50％；且各组小鼠瘤重明显低于PBS组（P<0.05）。结果表明T+F+E、T+F、T+E和T组小鼠对SP2/0-NS3肿瘤细胞有明显抑制作用。　　 1.6重组蛋白的治疗作用：T+F+E、T+E和T组小鼠的肿瘤在生长过程中受到不同程度的抑制。T组和T+E组小鼠的生存期高于PBS组（P<0.05）。　　 2.Al（OH）3和弗氏佐剂增强丙肝重组蛋白联合疫苗免疫效果的研究　　 2.1体液免疫：T+F+E+Al（OH）3和T+F+E+弗氏佐剂均刺激产生了特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体（P<0.05）。T+F+E+Al（OH）3组的特异性IgG2a抗体效价显著低于T+F+E+弗氏佐剂组（P<0.05）。表明Al（OH）3佐剂和弗氏佐剂均能较好的增强机体的体液免疫，但弗氏佐剂增强细胞免疫的能力明显强于Al（OH）3佐剂。　　 2.2分泌IL-4和IFN-γ的淋巴细胞水平：T+F+E+Al（OH）3组和T+F+E+弗氏佐剂组激活的分泌IL-4和IFN-γ的淋巴细胞数均高于T+F+E和PBS组（p<0.05）；两佐剂组之间无显著性差异（P>0.05）。　　 2.3小鼠脾细胞特异性CTL杀伤活性：当效靶比为25：1、50：1和100：1时，T+F+E+Al（OH）3组和T+F+E+弗氏佐剂组CTL杀伤活性均明显高于T+F+E组和PBS对照组（P<0.05）；两佐剂组之间无显著差异（P>0.05）。　　 2.4免疫小鼠对皮下移植瘤攻击的抑瘤作用：T+F+E+Al（OH）3组和T+F+E+弗氏佐剂组小鼠60天存活率均为100％，而T+F+E组和PBS对照组仅为40％；两佐剂组小鼠瘤重无统计学差异（P>0.05），但明显低于PBS组（p<0.05）。　　 结论：　　 1.T+F+E、T+F、T+E能诱导高水平的特异性的体液免疫和细胞免疫，并能有效地预防和治疗SP2/0-NS3细胞的攻击。　　 2.Al（OH）3佐剂和弗氏佐剂均增强了T+F+E诱导的特异性体液免疫和细胞免疫，弗氏佐剂对细胞免疫具有更强的增强作用。