流式细胞仪自动化快速初筛化合物诱导微核作用的研究

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随着化工工业的发展,环境污染越来越严重,对人类的遗传物质产生损害、造成畸变等的化学物质不断进入我们的生活环境,对人类的健康造成了严重的威胁。在有毒化合物遗传的快速初筛试验中,致突变检测尤为重要,在国际防止环境致突变性和致癌物委员会(ICPEMC)划分的5个遗传学终点中,涉及染色体损伤的有2个,它们是染色体分离障碍以及染色体数目和结构异常。而检测染色体损伤最常用而有效的方法之一就是微核试验(MNT)。  为快速检测化合物诱导微核的作用,需要建立一套快速、准确的自动化检测微核方法。本研究尝试利用单一荧光试剂吖啶橙(AO)和简单的单激光流式细胞仪计数骨髓嗜多染红细胞的微核率,达到了解化合物诱导微核作用的目的。实验首先采用了经典的染色体断裂剂环磷酰胺腹腔注射小鼠和大鼠,24小时后采集骨髓细胞,经过固定和AO染色,利用单激光流式细胞仪计数微核,计数结果用WinDMI软件进行分析,做出等高图并设置窗口。结果发现,随着CP浓度的增高,骨髓细胞的含微核的嗜多染红细胞(MNPCE)也相应增多,呈良好的量效关系。为进一步验证方法的可行性,改用了经典的非整倍体毒剂秋水仙碱腹腔注射小鼠和大鼠,用同样方法计数骨髓MNPCE,也呈现相同的量效关系。实验结果同时和手工计数比较,没有显著性差异。  本研究结果表明:(1)采用单一荧光染色(AO染色)和单激光流式细胞仪快速初筛化合物诱导微核作用是可靠的,较传统的手工方法更为灵敏,并节省了大量时间;(2)由于实验只采用单一试剂和简单的单激光流式细胞仪,较其他流式细胞仪自动化检测微核的方法,如双激光流式细胞仪自动化或CD71抗体标记、PI染色等的方法,节省了成本,操作也更为简单。本研究为我们初筛化合物诱导微核作用提供了良好的实验手段。
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