硝唑尼特(NTZ)及其活性代谢产物替唑尼特(TIZ)具有广谱的抗原虫,抗肠道寄生虫,抗病毒,抗菌等生物活性。但这些活性的机制是否与抗炎和抗氧化及其细胞自噬有关尚无研究报道,为此我们展开了相关研究以揭示其中的关系。通过给予Raw264.7细胞LPS(1μg/mL)刺激建立炎症和氧化应激模型,TIZ(25,50,75,100μM)作用后检测IL-6分泌和COX-2的表达量以评估TIZ对炎症细胞因子的作用;用DCFH-DA荧光探针检测ROS生成;同时,用试剂盒检测MDA的生成量,CAT、SOD、GSH-Px酶活性和GSH含量,以评估TIZ抗细胞氧化应激的作用。结果显示,LPS刺激后细胞表现出显著性的炎症反应和氧化应激效应;而给予TIZ处理后,细胞IL-6分泌和COX-2表达量随TIZ处理呈剂量相关性的下降,ROS和MDA生成量也显著下降,但GSH含量以及CAT、SOD、GSH-Px酶活性呈剂量相关性的显著性上升。由此可见,TIZ能抑制LPS诱导的Raw264.7细胞炎症反应和氧化应激。但这一新的生物活性其作用机制是什么,我们还不甚了解。细胞自噬广泛参与各种生物作用,TIZ的药物作用过程也可能有细胞自噬的参与。通过透射电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察在TIZ作用下自噬体的形成;Western blot检测TIZ作用于不同细胞系自噬标志物LC3II的表达水平以及p62、Beclin-l、Atg7、Atg5-Atg12的表达水平以验证TIZ的自噬作用。然后采用Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平以研究TIZ诱导自噬的信号通路;使用LY294002和Rapamycin观察自噬相关蛋白的变化以验证其通路。结果显示透射电子显微镜观察到相比于对照组,TIZ处理组细胞内吞噬泡和自噬体明显增多;激光共聚焦显微镜进一步证实LC3转化的绿色斑点TIZ处理组呈浓度依赖性显著增加;Western blot检测结果表明,相比于对照组,TIZ作用于不同细胞系均能明显上调LC3-II蛋白表达水平,且差异具有显著性(P<0.01)。与此同时,TIZ作用于Raw264.7细胞下调p62蛋白表达水平,且具有浓度和时间依赖性;减少Akt、mTOR、ULK1的磷酸化水平,且具有浓度依赖性,差异具有显著性。Rapamycin可以协同TIZ诱导细胞自噬。LY294002联合TIZ处理后p-PI3K/PI3K蛋白的表达低于TIZ组,但免疫荧光染色LC3II结果中绿色斑点明显减少,LC3II的蛋白表达水平也显著降低,自噬受到抑制。提示LY294002可以抑制TIZ诱导的自噬,可能是因为LY294002通过抑制PI3KIII途径发挥作用。综上所述,表明TIZ通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导细胞发生自噬,进而影响其生物学活性。