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目的:通过观察理肺化纤方含药血清对体外培养的鼠肺成纤维细胞增殖及MMP-2、TIMP-1和IFN-y表达的影响,验证理肺化纤方对肺纤维化的防治作用,推测其作用机理。
方法:将20只青紫兰兔按随机数字表法分为5组,即生理盐水组、地塞米松组、理肺化纤方高剂量组、理肺化纤方中剂量组和理肺化纤方低剂量组,分别用生理盐水、地塞米松及高、中、低剂量理肺化纤方煎液灌胃3天后心脏采血,制备含药血清;取乳鼠体外培养肺成纤维细胞,取生长良好的3-5代随机分为5组,分别为生理盐水组、地塞米松组和理肺化纤方高、中、低剂量组,每组细胞加入相应含药血清。MTT法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测鼠肺成纤维细胞中MMP-2、TIMP-1和IFN-Y的表达,统计实验数据。
结果:1 MTT测定含药血清对细胞抑制率可见:与生理盐水组相比,高、中剂量理肺化纤方含药血清对鼠肺成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01),低剂量理肺化纤方含药血清和生理盐水组没有差异;2流式细胞仪检测可见理肺化纤方高剂量含药血清可以促进鼠肺成纤维细胞凋亡;3免疫组织化学法测定可见:与生理盐水组相比,地塞米松组、理肺化纤方高剂量组、理肺化纤方中剂量组MMP-2、TIMP-1表达均明显减弱(p<0.01),理肺化纤方低剂量组无明显差异;IFN-y在地塞米松组、理肺化纤方高、中剂量含药血清组的表达明显增强(p<0.01),理肺化纤方低剂量组无明显差异。
结论:1.理肺化纤方可以抑制鼠肺成纤维细胞的增殖;2.理肺化纤方可以促进鼠肺成纤维细胞凋亡;3.理肺化纤方含药血清可以降低鼠肺成纤维细胞中MMP-2、TIMP-1的表达,同时提高鼠肺成纤维细胞中细胞因子IFN-y的表达。提示理肺化纤方可能是通过抑制肺成纤维细胞的增殖、促进肺成纤维细胞凋亡及调整细胞因子的表达而达到防治肺纤维化的目的。