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目的:
(1)检测树莓提取物中植物化学物质抗氧化活性;
(2)研究树莓提取物体外抑制肝癌细胞系HepG-2生长的情况;
(3)从mRNA水平检测树莓提取物对于肝癌细胞系VEGF和野生P53表达的影响;
(4)建立大鼠原发性肝癌动物模型;(5)研究树莓提取物中植物化学物质对于大鼠原发性肝癌的预防和抑制作用。
方法:利用气相色谱分析方法检测树莓提取物的抗氧化性;应用免疫组织化学方法,检测树莓提取物对于肝癌细胞VEGF(血管内皮生长因子)影响;MTT方法检测树莓提取物对于肝癌细胞系HepG-2生长的抑制活性;应用PCR(聚合酶链反应)方法检测树莓提取物对于肝癌细胞VEGF及野生p53的影响;利用化学毒物DEN(二乙基亚硝胺)建立稳定大鼠原发性肝癌动物模型,研究不同浓度的树莓提取物对于大鼠原发性肝癌的预防和抑制作用。
结果:随着树莓提取物浓度的增加,总氧化自由基清除能力(Total Oxyradical Scavenging Capacity,TOSC)也随之增加;MTT实验结果示:0.25mg/ml至10 mg/ml的树莓提取物对肝癌细胞系HepG-2的抑制率分别为7.17±1.39%、16.80±2.49%、28.00±1.80%、34.45±1.12%、46.01±1.63%、83.15±2.12%和86.16±1.36%(P<0.05);免疫组化实验结果示:对照组与各实验组肝细胞胞浆内VEGF的表达率分别为90.2±4.63%、83.6±5.17%、69.6±4.31%、61.6±5.37%和49.5±3.15%(P<0.05);RT-PCR实验结果显示:树莓提取物在体外有较强的抑制VEGF表达及影响野生p53表达的能力,树莓提取物随浓度升高,VEGF表达减弱,野生p53表达增强;动物实验证明:随着树莓提取物浓度的提高,实验组大鼠原发性肝癌成瘤率明显减低。大体所见,随着树莓提取物浓度的提高,实验组大鼠肝脏上的瘤径变小,瘤的数量减少,成瘤率减低,结节程度减轻;HE染色光学显微镜下也可以明显看到,随着树莓提取物浓度的提高,实验组大鼠肝癌的发生率明显减低;免疫组织化学观察结果:随着树莓提取物浓度的提高,实验组大鼠肝脏VEGF表达的程度明显降低。
结论:树莓提取物具有很强的抗氧化性,可以抑制肝癌细胞增殖、抑制肝癌细胞VE6F的表达、影响野生P53的表达。树莓中植物化学物质的上述活性可能在体内、外预防及抑制肝癌发生、发展中起决定性作用。