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核糖体蛋白L32(ribosome protein L32)是一种在动物、植物和酵母等不同生物类群中普遍存在的蛋白，其进化上相对保守。大多数真核生物的核糖体蛋白L32仅由一个基因编码，而粟酒裂殖酵母核糖体蛋白L32由两个基因编码，表达的蛋白质分别是L32—1和L32—2。本实验室前期已对L32—2基因进行了克隆表达，并对其功能进行了研究，表明其可能是一种潜在的转录调控因子。由于核糖体蛋白L32—1和L32—2的氨基酸序列相似度极高，为96．85％，为了更深入地研究和确定粟酒裂殖酵母核糖体蛋白L32—1和L32—2的功能，本文首先构建了l32基因的敲除和过表达酵母菌株，并对这些菌株的生长特性进行了研究。
本文首先提取了野生型粟酒裂殖酵母Schlzosaccharomyces pombe的基因组DNA，通过PCR反应扩增得到编码核糖体蛋白L32—1的基因132—1，将其连接到pMD18—T载体上，用双酶切连接的方法将其连入酵母表达载体pESP—3，构建质粒pESP—3/132—1，醋酸锂法转化SP—Q01菌株，构建过表达菌株SP—Q01(pESP—3/132—1)。另外，本实验室前期研究中已成功构建过表达菌株SP—Q01(pESP—3/l32—2)。
本文还成功构建了敲除l32基因的酵母菌株。通过设计三对引物，两轮over—lap PCR反应获得含有l32基因上下游同源臂的融合片段，将其导入SP—Q01菌株，通过同源置换原理，G418抗性筛选，最终成功构建了敲除菌株SP—Q01(Δl32—1)和SP—Q01(Δl32—2)的突变株。同时，在敲除菌的基础上，我们回补了相关基因，得到了基因回补菌株SP—Q01(Δl32—1，pESP—3/l32—1)、SP—Q01(Δl32—1，pESP—3/l32—2)、SP—Q01(Δl32—2，pESP—3/l32—1)、SP—Q01(Δl32—2，pESP—3/l32—2)。
最后，本文对l32基因的敲除或过表达菌株的生长特性进行了研究。测定其生长曲线发现，l32—1基因的过表达菌株的生长速度最慢；形态观察发现，敲除l32基因的酵母菌株SP—Q01(Δl32—1)和SP—Q01(Δl32—2)出现凝絮现象，过表达l32基因的菌株SP—Q01(pESP—3/l32—1)和SP—Q01(pESP—3/l32—2)出现了个体形态变长的细胞。具体的机制有待继续研究探讨。