中国淫羊藿属药用植物孢粉学及其药材品质评价研究

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目的:对中国淫羊藿属(Epimedium L.)药用植物进行花粉形态研究,从花粉形态的角度寻找种间的区别特征;建立一测多评法测定淫羊藿药材的黄酮类成分含量,以多指标成分控制法提高淫羊藿药材的质量控制水平,保证用药安全、有效及可控,为相关产业生产提供理论依据;对中国淫羊藿属药用植物进行HPLC特征指纹图谱探索性研究,分析比较其化学成分差异。通过其形态分类、花粉外壁雕纹变异情况、化学特征指纹图谱关联性分析,探讨中国淫羊藿属药用植物不同种间的差异,为中国淫羊藿属药用植物特别是存疑种的修订提供资料,以及提高质量控制水平提供依据。  方法:(1)应用扫描电镜对中国产淫羊藿属31种药用植物花粉的形态、大小和表面纹饰等进行观察和研究;(2)参照《中国药典》2010版一部附录ⅥD高效液相色谱法,检测波长为270nm,在一定的线性范围内,测定淫羊藿苷与朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的相对校正因子,并考察不同色谱柱、不同仪器测定各成分相对校正因子的重现性,以淫羊藿苷为对照品,用所建立的校正因子计算淫羊藿药材中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的含量;同时采用外标法测定102批淫羊藿药材中4种成分的含量,以验证一测多评法的准确性和科学性;(3)采用高效液相色谱法,色谱柱为Phenomenex Synergi4μ Hydro-RP80A(250mm×4.6mm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为270nm,柱温为25℃;通过方法学考察,分析测定121批淫羊藿药材,采用国家药典委员会推荐中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版进行评价分析,构建中国淫羊藿属药用植物的HPLC特征图谱。  结果:(1)中国淫羊藿属药用植物花粉形态特征研究结果表明,该属植物花粉形态多为长球形,少数为球形,大小为(15.5~25.0)×(27.3~48.1)μm,极面观多为三裂圆形,具三孔沟。花粉粒外壁表面纹饰有网状、条网状、条纹状等类型;(2)一测多评法结果表明,所建立各成分的相对校正因子重现性良好,分别为1.352、1.384、1.340,其RSD%均小于5%,采用该校正因子计算的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C含量值与外标法实测值之间没有显著性差异;(3测定了121批淫羊藿药材的指纹图谱,并分别标定箭叶淫羊藿、天平山淫羊藿、粗毛淫羊藿、巫山淫羊藿的共有峰。聚类分析结果显示不同产地、不同种类的淫羊藿所含成分的种类和含量差异较大,说明淫羊藿药材由于种类、分布地域等条件的不同,其内在品质具有一定差异。  结论:研究结果表明,中国淫羊藿属药用植物花粉粒外壁纹饰如网眼的形状、大小和网脊表面特征等在各物种间有一定差异,对该属植物的分类鉴定,以及探讨种间亲缘关系和演化规律等均具有重要意义;以淫羊藿苷为对照品建立的一测多评法准确可靠,简便可行,且节约对照品及检测成本,可以作为淫羊藿药材多指标成分测定质量控制方法;建立的淫羊藿药材的指纹图谱测定方法,为鉴别及有效控制不同种类淫羊藿药材质量提供了依据,并对筛选优良品种,扩大药用资源具有一定的参考价值。
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