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宫颈癌是由人乳头瘤病毒(Human papllomavirus,HPV)引起的一种常见的高发于女性的恶性肿瘤,其死亡率高居女性肿瘤第二位。近年来统计发现,我国农村地区宫颈癌筛查范围覆盖低,农村地区发病率和致死率均高于城市,并呈逐年增长趋势且发病年龄趋向年轻化,严重威胁女性健康。高危型HPV呈持续感染,尤其是HPV16和HPV18两个型,是导致宫颈癌的根本原因。此外,E6和E7蛋白的过表达在细胞恶性转化中起到至关重要的作用,为潜在的宫颈癌早期诊断标志物。目的:目前我国尚无商业化的基于HPV16E6和HPV18E7蛋白的免疫组化试剂盒,用于检测临床样本中的HPV16和HPV18。用于临床HPV16和HPV18检测的多为HPV DNA检测,不利于资源匮乏地区推广。为此,建立拥有自主知识产权的,基于HPV16E6和HPV18E7蛋白的免疫组化试剂盒更具优势。我们的目的是,以HPV16E6和HPV18E7蛋白为诊断标志物,建立特异性好、成本低的HPV16E6和HPV18E7蛋白免疫组化试剂盒,用于宫颈癌的早期诊断。方法:本课题采用经鉴定的HPV16E6和HPV18E7重组蛋白为抗原,分别用于抗HPV16E6和HPV18E7单克隆抗体的制备。并基于抗HPV16E6和抗HPV18E7单抗,分别建立宫颈癌细胞系的HPV16E6和HPV18E7蛋白检测免疫组化试剂盒。在此基础上,将建立的免疫组化试剂盒应用于临床样本的检测。结果:(1)以纯化的HPV16E6和HPV18E7蛋白为抗原免疫小鼠,经过亚克隆筛选,分别得到了7株和8株可稳定分泌特异性高、亲和性好的抗HPV16E6单抗和抗HPV18E7单抗的杂交瘤细胞株,并分别选择效价最高的属Ig G亚类单抗的HPV16E6-4D4、HPV18E7-E11细胞株进行单抗的制备与鉴定;(2)基于HPV16E6-4D4、HPV18E7-E11单克隆抗体,分别初步建立了宫颈癌细胞系的HPV16E6和HPV18E7蛋白免疫组化检测试剂盒;(3)用所建立的HPV16和HPV18蛋白免疫组化检测试剂盒分别检测临床样本,都成功检测出HPV16E6和HPV18E7蛋白表达阳性,与宫颈癌病理检查结果的符合率分别达95.23%和100%,均显示了良好的诊断性能与潜力。结论:本实验初步建立了HPV16E6和HPV18E7蛋白免疫组化检测试剂盒,并用于不同时期的宫颈癌或癌前病变组织临床样本检测,其具有成本低、特异性好的特点,可用于宫颈癌的早期诊断。