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目的:探讨Wnt/?-catenin信号通路在亚砷酸钠(NaAsO2)致人胚肺成纤维细胞(Human embryonic lung fibroblast,HELF)损伤中的作用,为阐述砷致肺损伤的分子机制提供研究依据。方法:1.MTT法测定NaAsO2染毒HELF细胞的LC50,确定染毒浓度及细胞抑制率。2.荧光显微镜和电镜拍摄细胞结构变化。3.NaAsO2染毒后,硫代巴妥酸法(TBA)测定MDA含量、二硫代二硝基苯甲酸比色法测定GSH-PX活性、黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。4.?-catenin si RNA转染30.00μmol/L的Na As O2处理过的HELF细胞。5.7-ADD联合Annexin V检测NaAsO2染毒及?-catenin si RNA转染后凋亡情况。6.实时荧光定量聚合酶链反应法(Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测NaAsO2染毒后?-catenin、C-myc、Cyclin Dl、Axin、Wnt5a及?-catenin si RNA转染后?-catenin、Wnt5a mRNA表达。7.蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测染毒后和转染后HELF细胞中?-catenin、C-myc、Cyclin Dl、Axin、Wnt5a蛋白表达。结果:1.Na As O2致HELF细胞24 h的LC50为135.04μmol/L。对照组NaAsO2浓度0.00μmol/L,低、中、高实验组NaAsO2浓度为10.00、20.00、30.00μmol/L。2.NaAsO2致HELF细胞线粒体肿胀、内质网扩张等微结构损伤。3.HELF细胞抑制率与NaAs O2浓度呈正相关(r=0.93,P<0.05)。4.SOD和GSH-PX活性随NaAsO2染毒浓度和染毒时间增加而降低(P<0.05),MDA含量随染毒浓度和染毒时间增加而升高(P<0.05)。5.HELF细胞早期凋亡率随染毒时间和染毒浓度增加而升高(P<0.05)。6.?-catenin、C-myc、CyclinD1 mRNA相对表达量随染毒浓度和染毒时间增加而降低(P<0.05),Axin、Wnt5a mRNA相对表达量随染毒浓度和染毒时间增加而表达增高(P<0.05)。7.?-catenin、C-myc、CyclinD1蛋白表达随染毒浓度和染毒时间增加而降低(P<0.05),Axin、Wnt5a蛋白表达随染毒浓度和染毒时间增加而升高(P<0.05)。8.?-catenin siRNA转染30.00μmol/L的NaAsO2染毒后的HELF细胞,早期凋亡率高于Control siRNA转染组和空白对照组(P<0.05)。9.?-catenin siRNA转染后:?-catenin、C-myc、CyclinD1无蛋白表达,Axin蛋白表达无明显变化(P>0.05),Wnt5a蛋白表达随染毒时间增加而增加(P<0.05)。10.?-catenin siRNA转染后,?-catenin mRNA几乎不表达,Wnt5a mRNA相对表达量随染毒时间延长而增加(P<0.05)。结论:1.NaAs O2可致HELF细胞微结构改变。2.NaAsO2可导致HELF细胞氧化损伤,抑制细胞增殖活性,诱导细胞凋亡。3.NaAs O2可致HELF细胞内Wnt信号通路负性调节因子Axin和Wnt5a基因表达升高,Wnt/?-catenin通路上游核心基因?-catenin,下游靶基因C-myc、CyclinD1表达降低,说明砷对Wnt/?-catenin信号通路的抑制可能是引起细胞增殖抑制,氧化应激,凋亡增加的分子机制之一。4.转染?-catenin siRNA,特异性抑制Wnt/?-catenin信号通路活性,可加重砷致HELF细胞的凋亡,使?-catenin、C-myc、CyclinD1基因表达缺失,而该通路负性调节因子Wnt5a表达升高,进一步说明砷对Wnt/?-catenin信号通路的抑制是砷致HELF细胞损伤重要机制之一。