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目的:IL-23是IL-12家族的新成员,通过Th17在自身免疫性疾病中发挥重要的促炎作用,但是IL-23的抗肿瘤作用尚有争议。本研究将通过构建可溶性IL-23受体蛋白链(sIL23Rc)表达载体pcDNA3.1/sIL23Rc,通过尾静脉高通量流体动力学注射法注射入荷瘤小鼠肝脏,使其体内表达以全身性封闭IL-23,探讨IL-23对肿瘤生长的作用及其免疫学机制。 方法:1、利用RT-PCR手段,扩增IL-23受体复合物的两个亚基胞外域的cDNA片段并在IL-12RB1片段3’端引入连接肽cDNA,利用T-A克隆获得高丰度的IL-12RB1和IL-23R的cDNA片段,将其与pcDNA3.1载体连接,获得真核表达载体pcDNA3.1/sIL23Rc,表达可溶性IL-23受体蛋白链(sIL23Rc),利用Western blot检测转染了该质粒的细胞培养上清中sIL23Rc的表达;利用RT-PCR检测sIL23Rc封闭IL-23的能力。2、通过尾静脉高通量流体动力学注射法将质粒注射入荷瘤小鼠肝脏并表达sIL23Rc以封闭IL-23,观察其对肿瘤生长的影响。3、利用RT-PCR和Western blot检测H22肿瘤细胞系、肿瘤组织分离的新鲜H22细胞和H22肿瘤组织中IL-23R的表达情况;使用裸鼠验证IL-23对肿瘤生长的作用是否主要依赖于T细胞。4、利用流式细胞术检测经sIL23Rc封闭IL-23后荷瘤小鼠脾脏和肿瘤浸润树突状细胞的成熟情况。5、使用低剂量环磷酰胺清除荷瘤小鼠调节性T细胞后,观察sIL23Rc对肿瘤生长,利用流式细胞术检测树突状细胞的成熟情况;利用RT-PCR和ELISA检测sIL23Rc对荷瘤小鼠肿瘤组织中IL-17表达的影响。 结果:1、pcDNA3.1/sIL23Rc能够表达可分泌的、有功能的IL-23受体蛋白链(sIL23Rc)。2、sIL23Rc能够促进小鼠H22肝癌的生长。3、IL-23不能直接作用于H22细胞;sIL23Rc对荷瘤裸鼠H22肿瘤的生长没有影响。4、sIL23Rc抑制荷瘤小鼠脾脏及肿瘤浸润树突状细胞的成熟。5、清除调节性T细胞后,sIL23Rc对BALB/c小鼠H22肿瘤的生长和脾脏及肿瘤浸润淋巴细胞中树突状细胞的成熟没有影响;sIL23Rc沉默荷瘤小鼠肿瘤组织中的IL-17的表达。 结论:sIL23Rc以可溶性形式封闭IL-23。sIL23Rc可能通过调节Th17途径增强调节性T细胞的作用,导致后者对树突状细胞成熟的抑制而促进肿瘤生长。我们的实验结果支持IL-23具有增强抗肿瘤免疫的作用。