黄梁木遗传转化再生体系的建立

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本研究以黄梁木(Neolamarckia cadamba(Roxb.)Bosser)无菌种子苗不同部位为外植体,采用器官发生途径,通过不同激素种类与浓度的配比,优化培养基成分及培养条件,建立黄梁木适于遗传转化的高效再生体系。通过甘露糖、潮霉素、头孢霉素等对黄梁木芽生长影响的敏感性试验,初步建立黄梁木的遗传转化体系。取得以下主要结论:  1.分别以无菌种子苗的子叶、真叶、胚轴为外植体,建立了黄梁木的再生体系。子叶不定芽诱导较好的培养基为MS+2,4-D0.5 mg/L+ZT0.5 mg/L+6BA1.5 mg/L,诱导率为46.67%;真叶不定芽诱导的较好培养基为MS+2,4-D0.5 mg/L+ZT1.0mg/L+6-BA2.0 mg/L,诱导率为73.33%;下胚轴不定芽诱导较好的培养基为MS+2,4-D0.5 mg/L+ZT0.5 mg/L+6-BA1.5 mg/L,诱导率为66.67%。所获得不定芽生长较好,但芽数量少。  2.采用两步法建立了黄梁木高效不定芽再生体系。较好的预培养条件为:光照强度1500~20001x,培养基为MS+6-BA3 mg/L+NAA0.1 mg/L+GA31 mg/L,预培养时间为20 d;较好的外植体为子叶;6BA较ZT、TDZ对子叶不定芽诱导效果更好,最佳培养基为MS+6-BA16 mg/L,诱导率为100%,有效芽数为14.0。  3.初步建立黄梁木遗传体系。甘露糖敏感性试验在本次试验中对黄梁木生长的影响并不明显,无法为下一步黄梁木的遗传转化做出筛选。黄梁木不定芽芽对潮霉素的敏感浓度为20 mg/L;对头孢霉素的敏感浓度为400 mg/L;头孢霉素抑制农杆菌生长的浓度为100 mg/L;农杆菌直接侵染外植体的过程中,头孢霉素既能抑制农杆菌生长又不影响外植体生长的最佳浓度为50 mg/L和100 mg/L之间。
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