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本试验采用HPLC法优选金银花中绿原酸的醇提工艺:根据中药药剂学理论研制了中药复方喷雾剂的生产工艺;采用HPLC法对中药复方喷雾剂中的绿原酸含量进行测定:通过加速试验和长期稳定性试验对中药复方喷雾剂的稳定性进行研究;采用皮肤急性毒性试验、皮肤刺激性试验、皮肤主动过敏试验对中药复方喷雾剂的安全性进行研究;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、新鲜鸡蛋清致大鼠足趾肿胀两种模型,研究了中药复方喷雾剂的抗炎作用;采用小鼠热板法研究中药复方喷雾剂的镇痛作用;通过对患病奶牛的临床应用研究了中药复方喷雾剂的临床疗效。
通过HPLC法对金银花中绿原酸醇提工艺中提取时间、温度、料液比、醇浓度的研究,采用四因素三水平的正交试验法得出醇法提取金银花中绿原酸的最佳提取工艺的最佳配比为75%乙醇浓度,料液比为1:14,60℃下回流提取1.5小时。
通过HPLC法对复方中药喷雾剂中绿原酸含量的测定,得出本制剂中绿原酸含量测定的最佳色谱条件为:以乙腈-0.3% H3P04溶液(10:90 V/V)作流动相,检测波长325nm,进样量20μl,流速1.0ml/min,柱温35℃。
加速试验和长期稳定性试验结果表明:研制的中药复方喷雾剂在加速试验条件下及室温条件下性状、装量差异、PH、乙醇含量、绿原酸含量等均未发生明显变化和含量减少,该制剂稳定性较好。
通过家兔及豚鼠分别对研制的中药复方喷雾剂进行皮肤急性毒性试验、皮肤刺激试验、皮肤主动过敏试验。结果显示,本制剂对豚鼠眼、粘膜等无任何改变,呼吸和中枢神经系统均无中毒表现,用药部位皮肤无任何反应,用药后7天内,全部豚鼠无一死亡,体重增长正常;皮肤过敏试验结果显示,皮肤反应正常,无红斑、水肿,致敏率为0;家兔背部皮肤裸露,以临床拟用量给予一次和多次皮肤刺激试验,结果显示,本制剂对皮肤无刺激性,可以长期使用。
采用二甲苯对小鼠所至耳廓肿胀法、蛋清足跖肿胀法、热板法等进行抗炎、镇痛试验。试验结果表明:本制剂高低剂量对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀的抑制率分别为55.47%,3.27%;对新鲜鸡蛋清致大鼠足趾肿胀4小时内的抑制率高剂量组分别为23.08%,26.58%,39.29%,37.50%;低剂量组分别为13.68%,21.30%,25.00%34.72%。对小鼠热板法痛阈的影响:麝香祛痛喷雾剂组和高剂量组在第60min时痛阈值达到最大,分别为40.50s,35.07s,低剂量组在第120min时痛阈值达到最大值28.11s。
选用潍坊某良种奶牛场用CMT法检测出具有隐性乳房炎的奶牛进行初步疗效观察试验。复方中药喷雾剂治疗组治疗10头牛36个阳性乳区,治愈32个,有效35个,无效1个。治愈率88.9%,有效率97.2%。效果与灌乳给药的同类中药制剂乳炎康效果相当。表明复方中药喷雾剂对隐性乳房炎具有较好的治疗作用。