弓形虫病(Toxoplasmosis)又称弓形体病,是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)所引起的一种人畜共患寄生虫病。该病呈世界性分布,在温血动物中广泛存在,猫科动物为其终宿主和重要的传染源,中间宿主包括多种哺乳类动物、禽类和人等。动物感染弓形虫病常导致孕畜流产、弱胎、死胎及木乃伊胎等,已给畜牧业造成严重的经济损失,也给人类的身心健康带来了巨大威胁。本研究设计特异性引物对弓形虫棒状体蛋白ROP4基因进行了PCR扩增和克隆,构建弓形虫棒状体蛋白ROP4基因的原核表达载体,在大肠杆菌中进行了表达,应用Western blotting技术对表达产物进行了反应原性分析。并对表达后重组蛋白进行了纯化,与弗氏佐剂混合接种BALB/C小鼠,测定细胞免疫和体液免疫水平,以此检测重组蛋白的免疫原性。结果表明,PCR扩增出了1219bp RH株ROP4基因片段,对所克隆的ROP4基因序列与已发表的序列(AY662677)进行比较分析,其同源性达到99.9%,证明了该基因片段为弓形虫ROP4基因。并将ROP4基因克隆至原核表达载体PET-30a-c(+),经酶切及PCR鉴定,证明成功构建了表达载体pET-30a-c(+)/ROP4。构建的表达载体经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21中进行表达,在经过4h时表达量最高,SDS-PAGE和Western blotting检测表明,该蛋白具有较好的反应原性,其分子量为44.9kDa,以可溶性蛋白为主。接种BALB/C小鼠后,能够提高动物机体的细胞免疫,具有较好的免疫原性。本试验为弓形虫病的深入研究及疫苗的研制提供了科学的理论依据。