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目的：研究丹参酮IIA对糖尿病大鼠体内氧自由基和p38MAPK信号通路的作用,同时观察对高糖刺激的血管平滑肌细胞增殖和细胞中p38MAPK信号通路的影响,探讨丹参酮IIA对糖尿病大鼠血管并发症的作用机制。
方法：
1)腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立糖尿病大鼠模型,组织贴壁法进行血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的原代培养,SMA免疫组织化学染色鉴定VSMC;2)逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量测定NADPH氧化酶p22phox、p47phox亚基mRNA的丰度；3)铝酸法测定过氧化氢(H2O2)含量,丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)分别用硫代巴比妥酸法(TBA)及黄嘌呤氧化酶法进行测定；4)BrdU(5-溴2-脱氧尿嘧啶)掺入DNA的ELISA法测定细胞DNA合成；5)western blot检测p38MAPK蛋白的磷酸化水平。
结果：
1)腹腔注射STZ 72h后连续三天测得空腹尾静脉血糖＞12mmol·L-1,确认糖尿病模型建立成功；通过对原代培养的大鼠VSMC进行SMA免疫组织化学染色,发现其特有的肌纤维,确定所培养的细胞为VSMC;2)糖尿病大鼠血管中NADPH氧化酶p22phox、p47phox亚基mRNA表达量增多,表明该氧化酶活性增强；3)丹参酮II A可升高糖尿病大鼠血清中SOD活性,降低氧自由基(H2O2、MDA)含量；降低糖尿病大鼠血管组织中p38MAPK蛋白的磷酸化水平；4)高糖可诱导VSMC增殖,并在一定的浓度范围内呈剂量依赖性；升高NADPH氧化酶p22phox、p47phox亚基mRNA的丰度；提高细胞中SOD水平,降低MDA含量；同时提高细胞内p38MAPK蛋白的磷酸化水平,呈现浓度、时间依赖性；5)使用丹参酮IIA干预细胞后,高糖诱导的VSMC的增殖得到明显抑制；同时升高高糖培养的细胞中的SOD活性,降低MDA含量；减少p38MAPK蛋白的磷酸化水平。
结论：
1)糖尿病大鼠机体处于氧化应激状态,血管组织中NADPH氧化酶活性增强,p38MAPK蛋白的磷酸化水平增加；丹参酮IIA治疗之后,可通过增强SOD活力改善高氧化应激状态,同时也抑制p38MAPK蛋白的磷酸化；2)高糖通过促进细胞中活性氧的产生,激活p38MAPK信号通路,诱导VSMC增殖,丹参酮IIA通过减少细胞中的活性氧来抑制p38MAPK信号传导通路,从而抑制细胞增殖,改善动脉粥样硬化。