尖孢镰刀菌西瓜专化型分子检测技术的建立及其效应子的初步鉴定

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目前,对于西瓜枯萎病的防治主要依靠化学药剂,但药剂残留严重,危害人类的健康,破坏全球环境。因此,加快西瓜枯萎病致病机理的研究是寻找有效防治方法的重要前提。效应子基因在病原菌侵染植物过程中起到关键的作用,对效应子基因进行初步功能研究,有助于在分子水平上了解病原菌的致病机制,为西瓜枯萎病菌的防治提供理论依据。本研究主要包括以下几个方面:1.在对全基因组测序和重测序的基础上,基于生物信息学分析结果,筛选出115个西瓜专化型的特异基因组片段。对其中2个最长的基因组片段设计引物,经过常规PCR反应,筛选并鉴定出FOW-2F/FOW-2R、FOW-3F/FOW-3R、FOW-4F/FOW-4R和FOW-6F/FOW-6R引物,可快速检测出西瓜枯萎病菌。结合西瓜枯萎病菌特异性引物和尖孢镰刀菌通用引物,设计一个双重PCR体系,可准确、快速检测出FOW;2.在全基因组测序的基础上,对基因组进行组装和注释。其中,FOW1的N50达到了2.16M。通过生物信息学分析,筛选出FOW1可能的分泌蛋白有137个。再用BLASTZ对FOW0、FOW1和FOW2进行比较基因组分析,鉴定出FOW1可能的效应子有27个。再使用KaKsCaculator软件计算基因组区域受到的选择压力,有7个受到正选择压力的影响;3.利用FOW1美国标准菌株侵染西瓜感病品种,对侵染前、后的植株根部提取RNA,进行转录组测序。结合基因组分析和转录组分析,以及和CS-20、黄瓜和甜瓜的同源基因比较分析,比较培养状态下的RNA-seq数据,鉴定出14个差异表达的基因;4.经q RT-PCR验证分析,FOW1A02929、FOW1A10400、FOW1A08150、FOW1A12121和FOW1A05310效应子的表达量明显上调,可能是致病效应子。综上所述:本研究利用双重PCR快速检测出FOW;通过比较基因组分析,对FOW1的致病相关蛋白进行分析,预测出候选效应子;通过基因组和转录组分析,预测出FOW1A候选效应子,并利用q RT-PCR实验验证了预测结果。这些研究发现均为西瓜种植区的病害诊断和西瓜枯萎病菌的防治等工作提供了理论依据。
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