【摘 要】
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1.对田间采集的马铃薯病叶进行ELISA检测,取结果呈阳性的样品分别提取马铃薯γ病毒(PVY)及马铃薯S病毒(PVS)的总RNA,参照文献报道的基因序列分别合成PVY和PVS的5和3引物,通过
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1.对田间采集的马铃薯病叶进行ELISA检测,取结果呈阳性的样品分别提取马铃薯γ病毒(PVY)及马铃薯S病毒(PVS)的总RNA,参照文献报道的基因序列分别合成PVY和PVS的5和3引物,通过RT-PCR扩增合成外壳蛋白的cDNA,并将其克隆至pGEM-T Easy载体上.经限制酶谱鉴定后进行全序列测定,结果表明:PVY-cp基因由801个核昔酸组成,编码267个氨基酸,与文献报道的3个PVY-cp基因相比同源性均在90﹪以上,且其编码的氨基酸同源性均在93.5﹪以上;PVS-cp基因由885个核昔酸组成,编码294个氨基酸,与文献报道的3个PVS-cp基因相比同源性均在82.5﹪以上,且其编码的氨基酸同源性均在93.5﹪以上.说明这些基因均具有很高的保守性.2.采自田间的花生病叶,经症状学鉴定,结果为阳性的提取其花生条纹病毒(PStV)总RNA,参照Cassidy(1993)等报道的基因序列,人工合成引物P1、P2,通过反转录PCR扩增合成PStV外壳蛋白(cp)基因的cDNA,并与pGEM-TEasy载体相连,经PCR初步筛选为阳性的克隆,进一步进行限制性内切酶进行酶谱分析,并进行全序列测定.结果表明.该基因由1084个核昔酸组成,包含了其cDNA完整的861bp编码序列(编码287个氨基酸)以及3端223bp非编码序列,与文献报道的PStV-cp基因相比,全序列同源性均在96﹪以上,编码区序列的同源性均在97﹪以上,其编码的氨基酸同源性均在97.5﹪以上,说明PStV-cp基因具有很高的保守性.
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