【摘 要】
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该实验首先利用鸡胚分离法由发生肾变病型传染性支气管炎的病鸡分离到了嗜肾型传染性支气管炎病毒X株,该病毒株能引起鸡胚发育受阻,鸡胚和雏鸡肾脏肿大、输尿管尿酸盐沉积,能
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该实验首先利用鸡胚分离法由发生肾变病型传染性支气管炎的病鸡分离到了嗜肾型传染性支气管炎病毒X株,该病毒株能引起鸡胚发育受阻,鸡胚和雏鸡肾脏肿大、输尿管尿酸盐沉积,能被IBV-M型血清部分中和.然后采用RT-PCR和套式PCR成功地扩增出IBV X株S1基因,核酸序列分析表明,X株与H52、H120、M41、BEAU和澳大利亚T株的核苷酸序列的同源性分别为75.8％、76.1％、76.3％、75.5％和76.9％,X株与上述5个标准株在S1基因上存在较大的差异.最后以含人结核杆菌热休克蛋白70基因全长序列的质粒pMT-70为模板,扩增出hsp70启动子,将其定向克隆于pUC-19,构建成重组质粒pY6013;然后以重组质粒pIJK-1为模板,扩增出分枝杆菌α信号肽基因并将其克隆到pY6013质粒中hsp70启动子的下游,得到了大肠杆菌-分枝杆菌表达质粒pY-α.将克隆的IBV X株S1基因经过一系列分子生物技术手段连接到pY-α,经限制性酶切后再连接到pRR3载体上,成功地构建了穿梭表达质粒pR α-S1,为进一步研究和开发分枝杆菌多价重组活载体疫苗打下了基础.
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