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目的：视网膜神经节细胞(Retinalganglioncell，RGC)和视细胞(Photoreceptor)的慢性进行性凋亡是许多眼病共同的病理生理学特征，它们包括青光眼、视网膜色素变性，以及各种原因引起的视神经萎缩等，到目前为止这些疾病还没有确切的治疗方法。银杏叶提取物(ExtractofginkgobilobaEGb761)对中枢神经系统慢性变性疾病有良好的控制作用，能够抑制中枢神经系统神经元的凋亡。业已证实，EGb761及其代谢产物可以在视网膜上达到足够的浓度。本研究利用SD大鼠和rds小鼠，通过在体实验研究EGb761对视网膜神经节细胞和视细胞的保护作用，利用视网膜神经细胞培养的方法，观察EGb761对视网膜神经细胞的保护作用，并对EGb761的保护作用机制进行多侧面探讨，为该药物的临床应用奠定药效学基础和理论基础。
方法：1.EGb761对大鼠视神经夹伤模型视网膜神经节细胞保护作用的实验研究：利用大鼠视神经夹伤模型，对阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(灯盏细辛)、低、中、高剂量EGb761组RGC存活率进行分析，确定药物的有效性。2.EGb761对rds小鼠视细胞保护作用的实验研究：以rds小鼠为研究对象，阴性对照组每天给予50ul生理盐水腹腔注射，EGb761组每天给予50ul无菌0.35％EGb761腹腔注射，通过视网膜外核层视细胞计数，结合电镜标本超微结构观察，评价EGb761对视细胞的保护作用。3.EGb761对培养人视网膜神经细胞保护作用的实验研究：以培养10天的人视网膜神经细胞为研究对象，经组化鉴定后，用MTT法测量不同浓度EGb761对视网膜神经细胞活性的影响。4.EGb761对谷氨酸致培养人视网膜神经细胞线粒体膜电位(MMP)改变的影响：培养的人视网膜神经细胞分为对照组、谷氨酸组和谷氨酸+EGb761组，经Rhodamine123标记后置于激光共聚焦扫描显微镜下，动态观察和记录所选细胞的荧光强度变化，确定EGb761干预谷氨酸所引起的MMP改变。5.EGb761对谷氨酸致培养人视网膜神经细胞内游离钙([Ca2+]i)改变的影响：上述各组细胞加入Fluo-3后，动态观察和记录所选细胞的荧光强度变化，确定钙内流的改变。6.EGb761对人视网膜细胞凋亡的影响：制备人视网膜细胞悬液，分为空白对照组、谷氨酸组、EGb761组、EGb761+谷氨酸组，加入AnnexinV染剂和PI染剂混匀，利用流式细胞仪测量，每个样本分析10000个细胞。7.EGb761对rds小鼠视网膜神经细胞凋亡相关基因表达的影响：rds小鼠分为EGb761组与空白对照组，于用药后14天和28天摘除眼球，用氯仿法提取RNA，经RT-PCT扩增后，定量Real-timePCR检测bcl-2和bax基因表达的相对量。
结果：1.大鼠视神经夹伤模型的结果显示，各EGb761组节细胞存活率与阴性对照组之间差异均有显著性，P＜0.05。随着EGb761剂量的增加，它的节细胞保护作用逐渐增强。2.通过rds小鼠的动物实验发现，用药第28天EGb761组外核层细胞计数平均为389个/高倍视野，对照组平均为362个/高倍视野，两者之间差异具有显著性，P＜0.05。电镜结果显示EGb761对视细胞纤毛和线粒体均有保护作用。3.MTT法结果表明：各EGb761组视网膜神经细胞的活性均高于对照组，给药浓度为0.04mg/ml时，视网膜神经细胞活性最好，为116.8±8.98％，与空白对照组相比差异具有显著性，P＜0.05。4.视网膜神经细胞在谷氨酸的作用下线粒体膜电位下降，EGb761能够增加线粒体膜电位，与对照组相比差异具有显著性，P＜0.05。5.视网膜神经细胞在谷氨酸的作用下细胞内游离钙明显增加，EGb761可对抗谷氨酸导致的细胞内游离钙增高。6.采用流式细胞仪测定AnnexinV和PI染色的结果：对照组视网膜细胞存活率为40.68％，谷氨酸组为32.45％，EGb761组为44.29％。谷氨酸组与对照组相比，视网膜细胞存活率明显降低(P＜0.01)。EGb761组与谷氨酸组相比视网膜细胞存活率明显增高，两者之间差异具有高度显著性。对照组早期凋亡的视网膜细胞为6.32％，EGb761组为4.59％，两者之间差异具有高度显著性(P＜0.01)。7.对rds小鼠视网膜细胞凋亡相关基因表达的研究表明，与对照组相比，EGb761组bax基因表达明显降低，bcl-2基因表达无明显差异。
结论：EGb761具有明显的视网膜神经细胞的保护作用，本研究的结果表明，它对视网膜神经节细胞和视细胞都有良好的保护作用。它能明显抑制视网膜细胞凋亡的发生，特别是对细胞早期凋亡事件的发生有显著的抑制作用。其作用机制为增加线粒体膜电位，抑制谷氨酸导致的线粒体膜电位下降，抑制钙内流，并且对凋亡相关基因的表达产生影响。EGb761对视网膜的影响是多方面的。