论文部分内容阅读
由黑粉菌(Ustilago scitaminea Syd．)引起的甘蔗黑穗病是甘蔗栽培上最主要的病害之一，在世界各植蔗区普遍发生，造成感病品种蔗茎产量和蔗糖分的严重损失，在旱地甘蔗上为害更为严重，培育抗病品种是最有效的措施。迄今甘蔗抗黑穗病性鉴定，仍采用人工接种田间种植的表型进行鉴定，但通过此法对抗性的确定至少需两年新植或一新一宿的种植鉴定，周期长、工作量大，难以对大规模的样品进行测试，只能在高代进行且存在环境的互作效应，针对抗病性的早代选择盲目性大。分子标记辅助选择是基于基因组核酸水平的差异，不存在环境的互作效应，因此，可显著提高鉴定的准确性和选择效率。本研究的目的是建立可检测甘蔗抗黑穗病性的SCAR标记。本文通过预备试验，优化了甘蔗RAPD反应组份和反应程序，建立了适于甘蔗的RAPD反应条件。采用随机引物PCR扩增，对杂交亲本Ya71-374、Co1001及其部分杂交后代进行了RAPD分析，筛选到与抗、感特异的多态性片段各一条，片段大小分别约为700bp和800bp。采用T-MD 18克隆载体，对700bp片段进行克隆，通过PCR和酶切鉴定，筛选阳性重组克隆子用于测序。测序结果显示该片段的实际长度为702bp，根据其两端的序列，设计了一对上、下游长度分别为23bp和22bp的引物，并对上述材料进行PCR检测。结果显示所有材料均扩增出一条702bp的条带，但感病亲本和感病个体中还扩增出一条长约400bp的多态性片段；初步研究还显示一组用于常规抗性鉴定的标准对照种也有类似的标记结果，从而将RAPD标记转化为SCAR标记，该SCAR标记有望用于甘蔗抗、感黑穗病基因型的鉴定。其上、下游引物的序列如下： 上游引物：5’TTCCCCCGCTGCCCTCTTTTCTT3’ 下游引物：5’TTCCCCCGCTCGGACACCTGTT3’