油菜抗除草剂及抗菌核病突变体在油菜无性系中的筛选及其检测

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油菜菌核病是世界范围的一种主要病害,对油菜生产造成严重的影响,油菜抗菌核病品种的选育是目前油菜育种的一个重要内容,同时培养抗除草剂作物又是解决目前农业劳动力成本增加和环境污染的有力手段。本研究以不同剂量的Co60-γ射线对湘油15种子进行诱变处理,处理后的种子利用毒素Basta和草酸作为选择压力,采用多步正筛选系统,进行抗病突变体筛选,希望能创建抗菌核病、抗除草剂的油菜育种材料。 本研究做了以下工作并取得了相关结果: 1.首先将湘油15的种子进行辐照诱变,发现10至12万伦琴的辐照剂量为较适合的诱变剂量。并利用草酸筛选抗草酸材料,最后从耐3.0mmol/L浓度草酸的油菜中筛选出K6,K7,K8,K9号等几株对菌核病菌有很强的抗性的油菜苗。 2.利用除草剂草铵膦(Basta)为筛选压,筛选出NO.5、6、7、8、9、10、11、12、13、18等10株抗0.09%除草剂Basta的油菜苗。并利用打孔叶片抗除草剂鉴定、除草剂喷洒鉴定、谷氨酰胺合成酶的活性测定等方法确定其抗性。 3.为了得到较好的SRAP检测的反应条件,本研究对油菜SRAP反应体系的模板、dNTP等进行了优化研究,结果表明25μL反应体系中,dNTP最佳浓度为0.2mM;引物浓度为1.0μM;Taq酶为2.0U;模板量最佳为15ng。并且利用SRAP方法对4株抗除草剂变异株及对照进行分子标记和遗传突变的研究.25对引物中2对引物扩增出明显的多态性,本研究建立的油菜SRAP体系重复性好。
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