目的预测鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophila psittaci,Cps）Ⅲ型分泌系统（Type Ⅲsecretion system,T3SS）效应蛋白编码基因,研究预测蛋白在感染细胞中的定位、免疫原性及其在感染细胞中的表达时相,为进一步研究其结构与功能奠定基础。方法用计算机辅助的生物信息学方法Effective T3.BPBAac tool,以及根据其他文献资料,预测Cps T3SS效应蛋白编码基因。提取Cps6BC菌株DNA为模板,设计特异性引物,PCR扩增预测Cps T3SS效应蛋白编码基因,酶切后连接到载体pGEX-6P-1,构建重组质粒pGEX-6P-1/目的片段,经PCR、测序鉴定后将其转化至表达宿主菌E.coli BL21中,IPTG诱导表达。Western blot分析和鉴定表达产物；对温度、IPTG浓度和时间等诱导表达条件进行系列的优化后,获得可溶性表达蛋白并大量诱导表达。GST树脂纯化重组蛋白,BCA法测定蛋白浓度；将重组蛋白经皮下注入免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清中重组蛋白多克隆抗体的效价,以评价这些蛋白的免疫原性；并以制备的多克隆抗体为抗,应用间接免疫荧光检测预测蛋白在感染细胞中的定位。在Cps感染后2、8、24、48h后,用Western blot检测这些蛋白的表达情况。结果应用生物信息学软件预测了5个可能的Cps T3SS效应蛋白编码基因：CPSIT0930.CPSIT0767.CPSIT0749.CPSIT0580.CPSIT0420.PCR扩增得到其目的片段；构建的重组质粒经PCR和测序证实插入片段为目的基因,测序结果与Genbank上登录序列完全一致；SDS-PAGE结果显示,在IPTG诱导下,对诱导表达条件进行系列的优化后,分别表达了相对分子量（Mr）与预测分子量相近的可溶性蛋白。重组蛋白经GST树脂纯化后,免疫雌性BALB/c小鼠,收集血清,抗CPSIT₀930、CPSIT₀767、CPSIT₀749抗体效价为1：16000,抗CPSIT₀580、CPSIT0420效价为1：8000。IFA进行细胞内定位发现CPSIT₀930、 CPSIT₀767、CPSIT₀749、CPSIT₀580、CPSIT₀420均定位于包涵体内。除CPSIT₀767在Cps感染后48h才开始表达外,其余蛋白均在感染后2h开始表达,8h后表达停止。结论1.CPSIT₀930、CPSIT₀767、CPSIT₀749、CPSIT₀580、CPSIT0420蛋白具有较好的免疫原性；2. CPSIT₀930、CPSIT₀767、CPSIT₀749、CPSIT₀580、CPSIT0420蛋白在Cps感染细胞中定位于包涵体内；3. CPSIT0930、CPSIT0749、CPSIT0580、CPSIT0420蛋白在Cps感染早期表达。