抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体细胞系的建立及抗体特性研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yisimple
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肝微粒体中参与内源及外源性物质生物转化酶系包括细胞色素P450氧化酶系、由NADPH及还原型细胞色素P450供氢的还原酶、葡萄醛酸转移酶、酯酶等。细胞色素P450(CYP450)是P450氧化酶系的末端氧化酶,是酶系的关键部分。肝脏是P450含量最丰富的器官。药物在体内的许多代谢动力学特征都与肝微粒体及CYP450有关。鉴于其重要作用,应用其特异抗体作为工具,可从功能、产物、蛋白质细胞内定位及组织细胞分布特点等方面确定参与代谢特定化合物及特定疾病的P450亚型,并为发现药物的潜在靶点及寻找潜在抗体药物提供重大线索。 我们以人肝微粒体蛋白为抗原免疫小鼠,被免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞按常规方法进行融合,经酶联免疫吸附测定法(ELISA)筛选杂交瘤,经ELISA、免疫组化(IH)、免疫印迹(Western Blot)、免疫沉淀(IP)对单克隆抗体特性进行鉴定。共获得216株杂交瘤,其分泌抗体类型为IgG1、IgG2a、IgG2b、及IgM,并且免疫组化(IH)、免疫沉淀(IP)和免疫印迹(Western Blot)鉴定结果有良好显示。文中讨论了本方法与传统单抗制备方法比较的优势、单抗制备过程中的注意事项、组分化抗原、抗原鉴定等问题,并对下一步研究工作进行展望。 本研究所制备抗体与人肝微粒体蛋白有特异性结合。后续以合成的人肝CYP1A2亚型多肽免疫小鼠,经筛选鉴定,制备的单克隆抗体亦呈现很强特异性。为下一步研究提供了基础与技术平台。
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