胡杨基因组大片段转化拟南芥及突变体生物性状分析

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随着土壤盐渍化已经发展为世界性的环境问题,高耐盐碱的胡杨作为一种十分珍贵的、拥有优良抗逆基因和精细复杂的表达调控元件的种质资源在抗逆研究中得到重视。本论文采用已构建好的胡杨大片段可转化BAC库为载体,以拟南芥为受体植物,进行胡杨大片段DNA转化、筛选及突变株系的鉴定研究,主要研究结果如下:1.优化了拟南芥培养、遗传转化及筛选程序。采用花粉管通道法将携带胡杨DNA大片段的农杆菌转化野生型拟南芥,对室内培养方法和侵染技术进行优化,将拟南芥的转化效率提高至45.57%。进行了拟南芥播种方式,侵染悬浮液的组分,筛选培养的选择等对比试验,确定了优化培养和筛选程序为:将种子播种到壤中;用5%的蔗糖+20%SilwetL-77为悬浮液;侵染量为每个菌号6~8株;侵染时间为5min,且不进行二次侵染;暗处理16~24h;筛选培养基为含有50mg·L-1Kan的1/2MS(大量元素减半,其余成分不变)。2.转化了1210个携带胡杨的大片段的农杆菌,共侵染了10032株野生型拟南芥,并得到2249株阳性植株,获得可观察的6个突变表型:植株矮化变异型;叶片黄化变异型;快速生长变异型;幼苗抗性弱变异型;根系短长变异型;叶片边缘呈锯齿状变异型。6个变异型共获得119株植株。3.对具有突变表型的所有株系进行电泳检测,确定该株系已成功转入大片段,并且正常生长并结种,T2代筛选时出现性状分离比为3:1。4.对快速生长突变型生长检测表明,从抽苔开始后十天的茎高增长量是野生型拟南芥的2倍左右,同时T2和T3代植株均出现快速生长的变异。快速生长突变型拟南芥的赤霉素含量是野生型的2倍,生长素的含量趋势与赤霉素相同,推断突变植物的表型出现可能是因为改变了赤霉素的原始平衡,导致其生长素含量改变,从而造成茎明显增长的现象。5.针对外源目的DNA的两端进行测序,但是没有在外源目的DNA片段中发现与生长相关酶的同源序列,全序列测序仍在进行中。
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