养阴清肺汤加味调控SMPP小鼠TGF-β 1/Smad3信号通路的机制研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aqgcsw2
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目的:运用循证医学评价炎症因子与重症支原体肺炎(Severe mycoplasma pneumonia,SMPP)相关性,了解其表达情况和预后。并观察养阴清肺汤加味方对SMPP小鼠肺组织TGF1/Smad3通路相关因子表达影响情况,探讨养阴清肺汤对治疗SMPP的可能作用机制。材料与方法:系统检索医学文摘资料库(EMBASE)、Pub Med医学数据库、Cochrane图书馆、web of science数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网(CNKI)、万方数据库及维普数据库以收集关于炎症因子与SMPP关系的病例对照研究。Revman5.6及Stata MP16进行统计分析及敏感性分析/异质性检验。120只BALB/c小鼠被随机分为正常组、模型组、阿奇霉素组、养阴清肺汤加味方组和中西医结合组,每组24只小鼠。除正常组外,均使用1010MP菌液连续滴鼻3天,致小鼠重症MP感染,在感染后第3天、第7天、第10天、第14天,各组每次6只小鼠被随机处死,并进行取材,并观察小鼠的一般状态,测量肺重量,计算各组小鼠肺指数。采用HE染色法观察小鼠的肺部病理,实施荧光定量PCR(q PCR)检测TGF-β1/Smad3通路相关因子表达,用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)测定炎症因子IL-17。结果:1.在这次Meta分析中发现,IL-6水平重症组血清平高于轻症组,重症组急性期明显高于缓解期患儿,重症组急性期明显高于健康儿童,缓解期患儿与健康儿童在血清IL-6水平暂无可比性。这提示IL-6参与了SMPP的发生发展过程,但尚不明确是否可以用IL-6来判断疾病缓解情况,还需要后续调查。IL-8水平重症组血清高于轻症组,具有显著性。但样本量相对较小,结果稳定性尚待判断。IL-10在SMPP患儿血清中升高还是降低仍存在争议,整体表现为重症组高于轻症组,差异有统计学意义。血清TNF-α水平重症组高于轻症组;同时也显著大于健康。可能由于纳入样本量偏小,且患儿确诊及入院时间不同,所在地区有所差异,重症时肺部炎症表现不同,并发症不同,治疗干预手段有所不同,采血时间不同,ELISA检测剂盒使用不一致,对炎症因子结果影响大较大,但整体趋势仍可观察到。2.对各组小鼠日常生活活动观察可发现,模型组、阿奇霉素组、养阴清肺汤加味组、中西医结合组感染MP后第3天部分小鼠出现不同程度的明显倦怠、饮食量减少,甚至出现立毛反应,鼻子出现分泌物,其中中西医结合组反映最轻,造模组反映最重。肉眼观察模型组肺组织形态萎缩,可见暗红色瘀斑;养阴清肺汤加味方组与阿奇霉素组肺组织色增大,暗红,有明显充血和水肿;中西医结合组肺组织表面光滑,存在轻度的水肿,但无充血。通过对肺指数的评定,可以发现给药后组肺指数较模型组降低,结合组效果最好;在光镜下观察模型组小鼠肺泡间隔显著增宽,肺泡腔及肺间质充满炎性细胞浸润,肺泡壁断裂,肺泡融合,存在大量炎性细胞,可见肺淤血;阿奇霉素组炎性渗出较模型组减少,少量肺泡壁断裂及肺泡融合情况;养阴清肺汤加味组存在炎性细胞,肺泡间增宽不明显,存在少量肺组织淤血、水肿,可见淋巴细胞,浆细胞、中性粒细胞;中西医结合组改善最明显,仅见少量炎性细胞浸润。在肺病理评分上也验证了这一结果,肺指数与病理评分均在第七天达到峰值,MP感染三组与正常组相比升高(P<0.05)。3.采用ELISA检测方法对小鼠血清中IL-17进行检测,模型组小鼠血清IL-17呈增高趋势,在第7天达到峰值,之后有所下降,与正常组相比上升具有显著性(P<0.05);各给药组血清IL-17也均在第7天达到峰值,之后呈下降趋势;与模型组比较,各给药组血清IL-17的含量均明显降低(P<0.05);第3、7、14天,与养阴清肺汤加味组、阿奇霉素组比较,中西医结合组IL-17表达降低(P<0.05);在给药第10天中西医结合组与阿奇霉素组比降低没有显著差异,与养阴清肺汤加味组相比降低有显著差异(P<0.05);给药组从第7天开始显现明显给药效果,第14天效果最好,中西医结合组效果最好,但仍与正常具有显著性(P<0.05)。4.采用qPCR的方法对小鼠肺组织中TGF-β1、Smad3基因表达水平进行检测,模型组TGF-β1、Smad3基因表达水平上升,于第7天之后有所下降,各时间点表达水平显著高于正常组(P<0.05);各给药组肺组织中TGF-β1、Smad3与模型组相比明显降低(P<0.05),第7天效果最明显;在第3、7、10天,肺组织中TGF-β1、Smad3在结合组降低水平更明显,比其余单一给药组下降更显著(P<0.05),但仍与正常组存在差异性(P<0.05)。小鼠肺组织中TGF-β1、Smad3基因表达趋势具有基本一致性。结论:1.MPP患儿严重程度与外周血IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平具有一定相关性。SMPP患儿外周血IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平升高。单一炎症因子水平不能作为独立判断疾病严重程度趋势的标准。本研究纳入文献有局限性,上述结论需进一步的对其进行验证证实。2.养阴清肺汤加味可能对高载量MP诱导的SMPP BALB/c小鼠模型对TGF-β1/Smad3信号通路及IL-17因子表达的产生了影响,均为抑制性调节。使用养阴清肺汤加味和阿奇霉素中西医结合治疗SMPP可能有良好的效果。
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