MiR-223靶向IGF2和ZEB1调控家禽成肌细胞的增殖和分化

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuzhenguo_09
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MicroRNA是一种内源性小分子非编码RNA,广泛存在于真核生物中并参与调控各类细胞进程。大量研究表明,miRNA参与了鸡胚生长发育、神经细胞和肌肉细胞的增殖和分化、细胞迁移、性成熟和免疫应答等一系列生命活动,对肉鸡的生长、发育和代谢具有重要的调控作用。本研究在实验室前期成果的基础上,筛选出miR-223作为研究肉鸡生长性能的候选基因,并以miR-223为切入点,一方面探索miR-223在骨骼肌生长发育中的生物学功能,另一方面研究miR-223及其靶基因作用于骨骼肌细胞增殖和分化的分子机理。论文主要结果如下:1.通过qRT-PCR技术发现miR-223在鸡胚肌肉发育过程中呈先上升后下降的趋势,其中,在肌肉快速发育的12E-17E高表达,说明miR-223参与鸡胚的肌肉发育。2.通过成肌细胞的体外诱导分化实验发现miR-223在成肌细胞分化过程中持续极显著上升(P<0.01),说明miR-223可能对成肌细胞的分化具有重要调控功能。3.通过流式细胞术、CCK-8和qRT-PCR检测过表达和干扰miR-223的成肌细胞,结果表明:miR-223在成肌细胞中具有抑制细胞增殖和促进细胞分化的功能。4.利用生物信息学分析和参考文献报道,预测与细胞增殖分化相关的IGF2基因和ZEB1基因为miR-223的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和western blot等试验,确定miR-223能够靶向抑制IGF2和ZEB1基因的表达。5.过表达和干扰IGF2的实验中发现,IGF2基因能够促进家禽成肌细胞的增殖、分裂和分化过程(P<0.01);干扰ZEB1基因能够促进家禽成肌细胞的分化(P<0.01)。本研究由上述结果得出结论:gga-miR-223靶向IGF2抑制成肌细胞的增殖,靶向ZEB1促进成肌细胞的分化。本论文揭示了miR-223在家禽骨骼肌生长发育中的功能和调控机制,为进一步认识miR-223在细胞增殖、分化和其他生物学进程中的作用提供了依据。
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