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近年来，由肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae，MP)引发的肺炎发病率有呈逐年上升的趋势，并且出现越来越多耐药菌株。而已有的针对支原体引发肺炎的有效疫苗研究尚未获得成功，开发人用肺炎支原体疫苗具有重要运用价值。 肺炎支原体体外生长培养要求很高，对营养物质的要求也比一般细菌的高。因此，筛选生长快、滴度高的培养基是灭活疫苗生产工艺研究中的一个重要环节。目前用于肺炎支原体分离培养常用的是PPLO肉汤培养基，但其培养时间长，产量低，不利于肺炎支原体的大量培养。研究探索培养成本低、培养效率高的培养基对肺炎支原体抗原的生产至关重要。本试验在此PPLO肉汤培养基配方的基础上，通过连续运用单因素实验—Plackett-Barman实验—最陡爬坡实验—中心组合实验等统计学方法，对肺炎支原体现有培养基进行一定改良，成功筛选出3种添加物及其浓度分别为脑心浸液5.68g/L，葡萄糖2.68ml/L，胰蛋白胨2.64g/L，结果表明，肺炎支原体在改良后的PPLO培养基中生长快，滴度高，有助于病原体抗原的大量培养。 在疫苗的研发中，ELISA抗原定量是体外评价疫苗效力的常用方法。本研究采用纯化的肺炎支原体免疫新西兰大白兔，制备抗血清，并经亲和层析柱纯化获得IgG作为包被抗体，以鼠抗肺炎支原体单克隆抗体作为检测抗体，再以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG作为酶标二抗，建立双抗体间接ELISA测定肺炎支原体抗原方法。结果肺炎支原体标准品在8-512EU/ml范围内，R2=0.995，线性关系良好，定量限度为8EU/ml，检测高、中、低3个浓度样品回收率在90.9％-110.0％之间，板内和板间精密实验的CV值均不超过15％，与多种相关抗原均无交叉反应。 二乙烯亚胺(BEI)和β-丙内酯(BPL)作为两种新型疫苗灭活剂，相比于甲醛存在很多的优势。本实验选用甲醛、二乙烯亚胺、β-丙内酯三种灭活剂，摸索三种灭活剂合适的灭活浓度和灭活时间，评价免疫效果。最终发现，甲醛组二次免疫后小鼠最高血清抗体几何平均滴度(GMT)为18.38，而二乙烯亚胺组和β-丙内酯组则最高分别为168.90和73.52，甲醛作为灭活剂制备疫苗的免疫抗体效价显著低于二乙烯亚胺与β-丙内酯组(p＜0.05)，本研究为肺炎支原体灭活疫苗的研制奠定基础。