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背景与目的:ETV5是ETS家族的转录因子之一,在生物体内广泛表达,其生物学功能涉及多个领域。GWAS发现ETV5基因的变异与人类的肥胖有关。ETV5基因敲除鼠也有体重下降和脂肪含量降低的趋势,表明ETV5在维持机体能量稳态方面具有重要作用。胃饥饿素(ghrelin)是一个由28个氨基酸组成的肽类激素,调节多种重要的代谢功能。Ghrelin需要被胃饥饿素O-酰基转移酶(GOAT)酰化成为活性胃饥饿素,从而发挥其生物学功能。然而GOAT和活性胃饥饿素的调节机制尚不明确。本课题以小鼠下丘脑CLU122细胞系和小鼠为模型,对ETV5在GOAT/ghrelin系统中的作用展开研究,以期为控制食欲和治疗肥胖症提供一个新型的药物治疗靶点。方法:1.分别用ETV5和ghrelin抗体对胃组织石蜡切片行免疫组化染色。2.通过转染CLU122细胞改变ETV5基因的表达水平,应用ELISA技术检测ghrelin含量的变化,通过Western Blotting检测GOAT的蛋白水平变化,通过qPCR检测GOAT mRNA水平变化。3.构建GOAT启动子的荧光素酶报告基因载体和ETV5质粒共同转染HEK293T细胞,应用双荧光素酶报告基因系统检测ETV5对GOAT启动子活性的影响。4.CLU122细胞通过转染或药物刺激改变mTORC1信号通路活性,用qPCR和WB检测ETV5的变化。5.分别通过注射药物和基因敲除抑制小鼠mTORC1活性,检测ETV5在体内表达的变化。6.CLU122细胞通过细胞转染改变ETV5的基因水平,随后加入药物抑制mTORC1活性,ELISA法检测活性胃饥饿素的变化。结果:1.ETV5和ghrelin在胃X/A样细胞中具有共同的表达区域。2.过表达ETV5基因可以增加GOAT蛋白水平的表达以及刺激活性胃饥饿素的分泌,对GOAT mRNA水平和总胃饥饿素的含量没有影响。3.ETV5显著提高了GOAT启动子的活性。4.在体外mTORC1活性负调控ETV5的蛋白水平,对mRNA水平没有影响。5.在体内抑制小鼠mTORC1活性,ETV5蛋白水平升高,mRNA水平没有改变。6.ETV5基因水平的改变影响了mTORC1对活性胃饥饿素的调节作用。结论:转录因子ETV5可以激活GOAT启动子的转录活性,增加其表达量,进而增加活性胃饥饿素的产量。ETV5受mTORC1信号通路活性的调节,并在一定程度上介导了mTORC1活性对活性胃饥饿素的调控。ETV5可能是产生Ghrelin的细胞中mTORC1-GOAT/ghrelin轴线的关键调节因子,也是机体能量失衡的潜在治疗靶点。