棉花是世界上种植面积最大的工业原料作物。我国是世界产棉大国,棉花生产的兴衰对国民经济的发展具有重大意义。目前世界上危害棉花生产的病害主要有棉花立枯病、炭疽病、棉铃疫霉病、棉叶斑病、棉花枯萎病及棉花黄萎病等,其中以棉花枯萎病、黄萎病尤为严重。棉花黄萎病(Cotton Verticillium Wilt)是棉花生长过程中最具毁灭性的病害之一。其致病菌大丽轮枝菌(Verticillium Dahliae Kleb,后文中简称Vd)分类学上属半知菌亚门(Deuteromycotina),淡色抱科轮枝菌(Verticillium),其特点是分布广、危害重、寄主范围宽、传播途径多、存活时间久,是一种极难防治的土传病害,被称为棉花的癌症。棉花枯萎病(Cotton Fusarinm Wilt)是棉花生产上危害最大的检疫性病害之一 多年以来,科学家针对棉花黄、枯萎病生物防治做了大量的研究工作,虽己取得很大的进展,但这方面的研究依然存在不少问题。其中最主要的问题是棉花黄萎病生物防治措施效果不够稳定,仍没有一个成功应用于大批量生产和推广的拮抗微生物。目前已有防治其他作物黄萎病的生防制剂商品,但还未见报道登记注册的防治棉花黄、枯萎菌的生防菌。 本文采用抑菌圈法及平板拮抗法从湖南、广西、北京等地采集的辣椒、黄瓜、烟草等根际周围土样中筛选到85个对棉花黄萎病和枯萎病有拮抗作用的微生物菌株。又经复筛后得到15个拮抗性较好的菌株,选择两株抗性最好的菌株A6、A7进行了进一步的研究。其中A6对棉花黄萎病、枯萎病的拮抗率分别为46.3%和56.7%,A7对棉花黄萎病、枯萎病的抑菌率分别为44.7%和48.2%。经检测发现,A6、A7对棉花黄萎病有拮抗作用的物质分别在培养18和20小时达到顶峰。通过16srDNA及Microlog-Biolog初步确定A6和A7为解淀粉芽孢杆菌。 为了了解菌株拮抗病害的初步机理,本试验通过对A6、A7的拮抗物质检测发现:菌株本身、其挥发性提取物、非挥发性提取物、非蛋白提取物和蛋白质提取物对棉花黄、枯萎病均有拮抗作用,其中非挥发性提取物作用最明显。A6的挥发性代谢产物对棉花枯、黄萎病的的抑菌率分别为50.0%、17.6%,A7的挥发性代谢产物对棉花枯、黄萎病的的抑菌率分别为33.3%、55.6%。A6的非蛋白提取物对棉花枯、黄萎病的抑菌率分别为28.6%、42.3%,A7的非蛋白提取物对棉花枯、黄萎病的抑菌率分别为23.7%、38.7%,而非挥发性提取物处理后,两种病原菌几乎不能生长。 本文研究了A6和A7的蛋白粗提液经温度和酶处理后的拮抗性。A6、A7的蛋白粗提液经40℃以下处理时拮抗能力与粗提液相当,40℃以上处理时,随着温度的上升拮抗能力越来越弱,当处理温度达到100℃时,几乎已经没有了拮抗能力。A6的蛋白粗提液经蛋白酶K和胰蛋白酶处理后对棉花黄萎病的拮抗率