毛细管电泳—电化学发光法对中药有效成分和违禁食用添加剂分析的研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wzsyxz
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本论文主要进行毛细管电泳-电化学发光法检测中药中有效活性物质及生物样品中违禁食用添加剂的研究。主要包括以下几个部分:  1.中药川乌中主要的活性物质为三种双酯型二萜生物碱:乌头碱、中乌头碱和次乌头碱。它们均含有叔胺基团并且能和吡啶钌在碱性条件下在电极表面发生氧化还原反应进而产生发光信号。我们利用这种性质对三种双酯型二萜生物碱进行毛细管电泳-电化学发光分析。在分析过程中加入离子液体(1-乙基-3-甲基咪唑-四氟硼酸盐),我们发现在不影响三种生物碱分离的条件下,离子液体能大大增强电化学发光信号。在实验过程中对毛细管电泳的分离条件和检测池中检测条件进行优化,最终实现三种乌头碱的在线分离与定量分析.三种乌头碱混合样品可以实现基线分离,分离度达到要求,而且最低检测限能达到10-8M,低于以往的报道。  2.对中药川乌中三种生物碱的含量进行考察,探讨不同的提取方法以及纯化方法对最终含量测定结果的影响。乙醇超声提取法提取乌头类总生物碱,通过对各种提取条件的优化,总结出乌头总生物碱最佳的提取途径。建立了一个新的溶剂萃取系统对双酯型二萜生物碱进行纯化,结果显示其双酯型二萜生物碱的纯化效率高,避免了原有柱层析分离等方法导致的分离效率低,时间长,与层析柱产生不可逆吸附等缺点,并且本方法在萃取过程中样品不会有损失,因此产率较以往方法高。本方法能从附子、川乌等乌头属中药材中分离提取各型生物碱,并能对其进行纯化,方法简便、快速,优于以往方法。最后,利用毛细管电泳-电化学发光检测技术对两种不同的提取方法进行了探讨,结果显示乙醇超声提取比氨水碱化乙醚提取有更高的提取效率。  3.毛细管电泳-电化学发光法检测瘦肉精。克伦特罗和沙丁胺醇是一类β2肾上腺素类神经兴奋剂,临床上用于治疗平喘,但现在被广泛的当做瘦肉精加入到牲畜的饲料中,以达到加速肌肉生长和脂肪燃烧、提高牲畜瘦肉量的目的。瘦肉精用量大、使用的时间长、代谢慢,导致屠宰上市前牲畜体内的残留量非常高。残留的瘦肉精通过食物进入人体,如果一次摄入量过大,就会产生异常生理反应以致中毒现象,严重的可导致死亡。我们利用克伦特罗和沙丁胺醇结构中胺基能与吡啶钌发生反应产生电化学发光信号的性质,对这两种瘦肉精类物质进行毛细管电泳.电化学发光分析,离子液体(1-乙基-3-甲基咪唑·四氟硼酸盐)同样被加入流动缓冲溶液中,用于增强产生的电化学发光信号。通过实验条件的优化,此方法可在10分钟内完成对克伦特罗和沙丁胺醇的检测,检测限为~10-7M。我们对生物样品(尿液)中克伦特罗和沙丁胺醇进行检测,结果表明生物样品中内源性物质对目标物的检测不产生干扰。此方法简单、快速、结果可靠,并且对尿液等生物样品无需进行复杂的前期处理。
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