论文部分内容阅读
目的：探讨DNA甲基化对T细胞CD40LG基因表达调控及其在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用。
方法：选取活动性SLE患者(女性6例，男性4例)，健康志愿者(女性6例，男性4例)，用磁珠分离法分离血CD4+T、CD8+T细胞及B细胞后，以T、B细胞以1:4比例混合于96孔培养板中(105细胞/孔)，培养8天，给与CD40LG单克隆抗体干预。药物处理组实验对象为健康志愿者(男性3例，女性3例)，用磁珠分离法分离血CD4+T、CD8+T细胞，分别予以DNA甲基化抑制剂5-azacytidine，Procainamide，及EKK信号通路抑制剂Hydralazine，PD98059处理72小时后与自体B细胞体外培养8天，ELISA法测定上清IgG产量。同时Realtime RT-PCR检测药物处理后CD4+T，CD8+T细胞CD40LG mRNA表达。
结果：在SLE患者组中，CD4+T，CD8+T细胞与自体B细胞体外培养上清中的IgG产量与正常对照组相比明显增高(P均=0.000)。在SLE女性患者组中，CD4+T细胞+B细胞及CD8+T细胞+B细胞混合培养的结果与预先加CD40LG单抗组比较IgG产量显著增高(P=0.034，P=0.047)，与B细胞单独培养对照组比较IgG产量也显著增高(P=0.011，P=0.012)。在SLE男性患者组中CD4+T细胞+B细胞及CD8+T细胞+B细胞培养后IgG产量较对照组亦有明显升高(P均=0.000)，但与预先加CD40LG单抗组比较无显著差异(P>0.05)。在活动性SLE患者中CD4+T细胞中CD40LG mRNA表达升高与IgG产量有相关性(r=0.809，P=0.001)。经5-azacytidine，procainamide，Hydralazine，PD98059处理后，正常女性CD4+T细胞CD40LG mRNA表达明显升高(P=0.002，P=0.047，P=0.039，P=0.048)。与自体B细胞体外培养上清IgG产量亦明显升高(P=0.02，P=0.026，P=0.013，P=0.008)。正常男性CD4+T细胞经药物处理后CD40LG mRNA表达及IgG产量无明显改变(P>0.05)。
结论：女性活动性SLE患者T细胞CD40LG表达升高，自身B细胞IgG抗体的生成增加。DNA低甲基化促进女性T细胞CD40LG表达上调和B细胞IgG抗体的产生。DNA低甲基化在SLE的发病中起重要作用。