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因为肿瘤-睾丸抗原是目前临床肿瘤免疫治疗的理想靶点,为了进一步评价HCA587在临床肿瘤免疫治疗的可能性,该课题从该基因入手,对HCA587在各种正常组织、肿瘤(特别是肝细胞癌)组织中实际蛋白表达水平的分布、诱导机体产生免疫应答的能力及分析和鉴定抗原特异性CD8<+>T淋巴细胞表位等进行研究,为HCA587应用于临床肿瘤免疫治疗奠定坚实的实验依据.该研究共分四个部分:1.HCA587在正常组织和肿瘤组织中的蛋白表达研究;我们以前的研究报告了HCA587在mRNA水平上的组织分布,为了研究HCA587的免疫原性,我们首先必须了解HCA587在各组织中的实际蛋白表达水平.在该部分研究中,我们用原核系统表达纯化了HCA587重组蛋白,制备了抗HCA587抗体,用免疫组化研究了HCA587在19种正常组织和15种肿瘤组织中的蛋白表达.2.HCA587在昆虫细胞中的表达、纯化和血清学分析;为了评价HCA587蛋白在体外诱导免疫应答的能力,分析其免疫原性,用Bac-to-Bac杆状病毒系统在昆虫细胞中表达纯化HCA587重组蛋白,以便和原核系统表达在重组蛋白配伍使用,从而排除由于表达系统残余蛋白引起的非特异性免疫应答.3.HCA587蛋白负载的自身DC诱导特异性CD4<+>和CD8<+>T淋巴细胞免疫应答的研究;当肿瘤发生后,机体通过细胞免疫和体液免疫协同发挥抗肿瘤作用,由于肿瘤细胞的组织来源和产生方式不同,其免疫原性的强弱有较大差别,为了评价HCA587的免疫原性,用自身CD细胞负载HCA587重组蛋白,体外反复刺激外周血分离的PBMC,检测HC587蛋白诱导的特异性CD8<+>和CD4<+>T淋巴细胞免疫应答能力.4.一个新的HCA587HLA-A*0201限制性CD8<+>T淋巴细胞表位的鉴定;为了深入研究HCA587诱导机产生特异性CD8<+>T淋巴细胞应答的抗原表们,我们根据MHC和抗原肽结合基序的特点,用生物信息学的方法预测该蛋白可能的MHC结合表位,用T2细胞的肽结合试验体外证明候选多肽和MHC分子的亲合力后,将筛选出的多肽负载DC,在体外从PBMC中诱导出针对该表位特异性CTL的致敏试验,再进一步观察致敏的肽特异性CTL对表达内源性HCA587蛋白的靶细胞的免疫反应性.