磁共振/荧光双模态纳米探针的构建及其在胰腺癌成像中的应用

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胰腺癌是一种消化道恶性肿瘤,早期症状不明显,诊断和治疗十分困难。目前临床上常将两种或多种成像模式联用来得到更灵敏、更准确的诊断信息。磁共振成像(MRI)与荧光成像(FI)联用形成的MRI/FI双模态成像具有组织分辨度高、穿透性强、灵敏度和敏感度高等优势,具有很好的发展前景。  目的:合成磁共振/荧光双模态纳米探针,并试用于胰腺癌的早期诊疗。  方法:通过酰化反应制备两亲性载体材料硬脂酰壳寡糖(COSSA)。将二乙三胺五乙酸(DTPA)嫁接于COSSA并螯合钆离子(Gd3+)制成磁共振对比剂COSSA-DTPA-Gd;另将异硫氰酸荧光素(FITC)共价结合至COSSA制成荧光探针COSSA-FITC。以核磁共振氢谱表征COSSA结构;紫外分光光度法测定COSSA中的SA取代度和COSSA-FITC中的FITC标记率;全谱直读等离子发射光谱仪测定COSSA-DTPA-Gd中Gd3+的含量,计算DTPA的取代度;马尔文粒度仪测定胶束粒径和电位;透射电子显微镜观察胶束形态;芘荧光探针光谱法测定临界胶束浓度(CMC);MTT法评价COSSA-DTPA-Gd的细胞毒性;荧光显微镜和流式细胞分析仪研究COSSA-FITC的对肿瘤细胞的标记能力;最后将COSSA-DTPA-Gd和COSSA-FITC按剂量组装形成双模态纳米探针Gd/FITC-NMs,以人胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的体内MRI和FI评价Gd/FITC-NMs对胰腺癌的双模态成像功能。  结果:COSSA中SA的取代度为3.8%; COSSA-FITC中FITC的标记率为8.37%;COSSA-DTPA-Gd中Gd3+的含量为482μmmol/g,DTPA取代度为7.8%。COSSA在水中的CMC为1.71μg/mL,可自发形成胶束,粒径141.2nm。COSSA-DTPA-Gd粒径为148.2nm,电位为0.259mV,COSSA-FITC粒径为129.6nm,电位为0.274mV,TEM观察COSSA、COSSA-DTPA-Gd和COSSA-FITC形态近似球形。COSSA-DTPA-Gd对Mia-pacaⅡ细胞没有明显毒性。COSSA-FITC可被Mia-pacaⅡ细胞摄取,使细胞呈现出黄绿色荧光。Gd-FITC-NMs的体外弛豫率为12.6mM-1s-1,高于市售小分子磁共振对比剂马根维显(6.33mM-1s-1)。荷瘤鼠尾静脉注射Gd/FITC-NMs后,通过MRI能清晰观察到胰腺肿瘤的位置和形态,成像效果优于马根维显;FI结果显示裸鼠肿瘤组织具有较强的荧光。  结论:本文构建的MRI/FI双模态纳米探针Gd/FITC-NMs能够显著提高胰腺癌的磁共振成像效果,同时在肿瘤组织呈现较强荧光,提高了诊断的准确性。
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