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蓝狐(Alopex lagopus)是国内家养数量最多狐狸品种,由于其毛皮颜色变异较多,毛皮质量上乘,是具有重要经济价值的毛皮动物。然而蓝狐僵化病的出现给养殖业带来了极大的损失,进而影响了整个蓝狐养殖产业的经济效益。近年来,我国许多研究所及高校对该病进行了多方面的研究,然而该病一直没有找到特异性防治及治疗的措施。 本论文(1)以大兴安岭地区图强林业局蓝狐养殖基地的40只健康蓝狐和60只患僵化病蓝狐为实验对象,采用随机扩增微卫星多态性(random amplified microsatellitepolymorphism,RAMP)进行遗传多样性检测。(2)以哈尔滨巴彦华强皮草有限公司饲养场的30只健康蓝狐和30只患有僵化病蓝狐为实验对象,运用尾分析法寻找与僵化病有关的差异标记,进而分析发病的遗传原因,为今后的实际生产提供理论依据。本论文主要的研究结果如下: (1)在RAMP标记检测中,22个引物组合能够扩增出清晰并具有多态性的条带。在对照组的40只健康蓝狐个体中,总共产生194条带,其中多态性条带有134条,占总条带数的69.07%,每个引物扩增出4~8条多态性带,平均为6.09条。在实验组的60只患僵化病蓝狐个体中,共产生154条带,其中多态性条带有53条,占总条带数的34.42%,每个引物扩增出1~4条多态性带,平均为2.41条。对比两组的多态性比率、遗传距离指数及聚类分析的结果表明健康蓝狐种群内遗传多样性较高,遗传变异丰富,而患僵化病蓝狐种群内遗传多样性相对较低,遗传分化程度不高,遗传变异较低,即蓝狐人工授精导致的近亲繁殖所致。 (2)尾分析法对蓝狐僵化病相关的特异片段进行遗传分析。用120条随机引物分别对两组DNA池进行RAPD扩增检测,初步筛选出12条产生清晰、稳定扩增产物的引物,在两组以相同条件又进行3次重复扩增。结果显示,有4条引物稳定扩增出能将健康蓝狐和患僵化病蓝狐区分开的差异条带,分别是引物A7、A11、A19及E10。 (3)对引物A7的1号条带(特异片段)进行克隆测序,所测得的序列长度为1851bp,通过NCBI中的Blast序列比较分析,该序列与家犬XX-7d6全序列同源性达96%。 (4)对引物A11的1号、3号条带进行克隆测序,1号条带的基因序列长度为1847bp,通过NCBI中的Blast序列比较分析,该序列与猪DNA序列ch242-423 m21X号染色体的同源性达82%;而3号条带所测得的基因序列的长度为956 bp,通过NCBI中的Blast序列比较分析,没有找到同源性,推测序列可能是僵化病蓝狐基因组中的变异序列。 (5)对引物A19的1号、5号条带进行克隆测序,1号条带和5条号带的基因序列的长度分别为2442bp和467bp,通过NCBI中的Blast序列比较分析,都没有找到同源性,推测序列可能是僵化病蓝狐基因组中的变异序列。 (6)对引物E10的1号、4号条带进行克隆测序,1号条带的基因序列的长度为2854bp,通过NCBI中的Blast序列比较分析,该序列与家犬DNA序列XX-266c17的同源性达97%;与家犬34号染色体上的XX-67L19完整序列同源性达97%;与家犬X染色体上的XX-272C1同源性达95%;与狗的DNA序列rp81-70i6同源性达95%;而4号条带的基因序列的长度为954bp,通过NCBI中的Blast序列比较分析,没有找到同源性,推测序列可能是僵化病蓝狐基因组中的变异序列。 (7)找到的差异标记对大兴安岭地区的健康蓝狐和患病蓝狐进行的检测及验证,计算出差异标记在群体的检出率分别为A7的1号条带93.33%;A11的1号条带91.67%;A19的1号条带77.50%,5号条带75.00%; E10的1号条带90.00%,4号条带96.70%。与本论文实验结果基本一致,从而为养殖产业育种提供可靠的理论依据。