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本实验应用膜片钳技术探讨腺苷对大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜钾通道活性调节的信号转导机制,进一步揭示肾脏髓袢升支粗段重吸收的机理。
方法：急性分离肾小管,镜下取髓袢升支粗段,采用单通道膜片钳记录技术。
结果：发现:
一、PLA2对大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-ps钾离子通道的调节：
PLA2的激动剂Melittin(5μmol/L)能使大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-pS钾离子通道的活性明显降低。通道的开放几率从0.27±0.13降低到0.04±0.03,洗脱后2分钟左右通道活性部分恢复,通道的开放几率恢复到0.11±0.04(n=5,p＜0.01):PLA2的抑制剂AACOCF3(5μmol/L)明显增加大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-pS钾离子通道的活性。通道的开放几率从0.21±0.10增加到0.49±0.18(n=5,p＜0.01)。
二、PLA2-AA、cAMP-PKA信号转导途径共同参与腺苷对大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-pS钾离子通道的调控
在PLA2抑制剂AACOCF3存在,钳制电压为0mV时,51μmol/L的CGS-21680不能明显增加大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-pS钾离子通道的活性。加药前通道的开放几率是0.35±0.13,加药后的开放几率是0.38±0.14(n=5,p＞0.05)。
在cAMP的类似物DBcAMP存在的情况下,5μmol/L的.AA没有明显抑制大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-pS钾离子通道的活性。加入AA前通道的开放几率是0.45±0.12,加入AA后的开放几率是0.42±0.13(n=5,p＞0.05)。
花生四烯酸环氧酶cyclooxygenase抑制剂indomethacin存在时,5μmol/L的CGS-21680能明显增加大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-pS钾离子通道的活性。加药前通道的开放几率是0.14±0.05,加药后的开放几率是0.37±0.09(n=5,p＜0.01);花生四烯酸细胞色素P450单加氧酶抑制剂17-ODYA存在时,5μmol/L的CGS-21680不能明显增加大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-pS钾离子通道的活性。加药前通道的开放几率是0.35±0.11,加药后的开放几率是0.38±0.11(n=5,p＞0.05)。
结果：表明:PLA2参与对大鼠肾脏髓袢升支粗段管周膜50-pS钾离子通道的调控;A2a受体被激活后通过cAMP-PKA信号转导途径而后又抑制了PLA2-AA信号转导途径增加钾通道的活性;A2a受体被激活后可能通过抑制PLA2-AA信号转导途径的细胞色素P450单加氧酶代谢途径增加50-pS钾通道的活性。