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猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)属于圆环病毒科(Circoviridael)圆环病毒属,可引起猪断奶后多系统衰竭综合症(PMWS),给世界养猪业造成相当大的经济损失。
本研究中将原核表达PCV2开放阅读框架2(ORF2)的两段蛋白(GST-PCV737-421;GST-PCV421-37)的重组菌pGEX-PCV737-421与pGEX-PCV421-37在含氨苄青霉素的2xYT培养基中进行诱导表达,收集菌液,超声波裂解,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),切下含目的蛋白的胶条,免疫BALB/c小鼠来制备单克隆抗体,经间接免疫荧光抗体试验(IFA)来筛选阳性克隆,再采用有限稀释法进行亚克隆,最终得到20株阳性单克隆。采用抗体亚类鉴定试剂盒对单抗的重链和轻链进行鉴定,确定了单抗的部分生物学特性,经IFA与WesternBlotting检测,所得到的20株单抗中有3株细胞为PCV2型特异性地单抗,它们为8B7-B1、9B6-A7和9E2-A10,其余17株细胞为PCV1与PCV2共反应单抗。将阳性单克隆扩大培养后注射12周龄经产健康雌性BALB/c小鼠来采取腹水,经IFA检测确定效价。挑选26H5-A3与9B6-A7单抗分别来做包被抗体,初步建立抗原捕获ELISA方法。
实验结果表明所筛选得到的20株阳性单克隆细胞抗体分泌稳定,所建立的抗原捕获ELISA方法采用单抗包被,多抗夹心,能够很好的将PCV2、PCV1与猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SI)等病毒分开,为今后建立PCV2诊断试剂盒打下基础。