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多糖是石斛的主要药用成分。现代药理学研究表明,石斛多糖具有延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤、降血糖等多种药理活性。本论文对鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum Lindl.)多糖进行了分离纯化,得到了两种精制多糖组分,并对其结构和抗肿瘤活性进行了初步研究。论文主要内容如下:
1、鼓槌石斛多糖的提取、分离、纯化。采用超声波辅助热水浸提的方法提取石斛粗多糖(命名为CDCP),Sevag和胰蛋白酶法结合除蛋白,得到精制多糖(命名为DCCP)。DCCP通过DEAE—Cellulose—52阴离子交换柱层析和SephadexG—100分子筛柱层析进行分离纯化,得到3种组分的多糖(分别命名为DCCPⅠ、DCCPⅠ—a和DCCP—Ⅱ)。其中DCCPⅠ、DCCPⅠ—a是主要成份。
2、建立了测定鼓槌石斛多糖单糖组成和含量的1—苯基—3—甲基—5—吡唑酮(PMP)柱前衍生化高效毛细管电泳的方法。毛细管电泳的分析结果表明CDCP中单糖组成和物质的量比为:木糖:阿拉伯糖:葡萄糖:鼠李糖:甘露糖:半乳糖:葡萄糖醛酸:半乳糖醛酸=8.6:7.1:31.8:1.8:32.6:10.4:4.2:3.6。计算鼓槌石斛多糖对葡萄糖的换算因子后用苯酚—硫酸法测定多糖含量,测得多糖含量为5.87%,供试液在90min内显色稳定,平均回收率达97.92±1.88%,RSD为1.88%(n=5)。
3、DCCPⅠ—a的结构分析。紫外光谱扫描的结果表明DCCPⅠ—a为均一组分;改良的苯酚—硫酸法测得多糖含量为79.5%;硫酸咔唑法测定糖醛酸含量为6.72%;凝胶渗透色谱法测得数均分子量为67kDa,重均分子量为122kDa;高效毛细管电泳测得单糖组成和物质量的比为木糖:葡萄糖:甘露糖=1.44:6.93:12.79;红外光谱和核磁共振确证了单糖组成,推知糖苷键的构型主要为β型,C—1质子为α型;β—消除反应推知存在O—糖苷键,以Ser和Thr的形式和糖环相连接;刚果红实验说明可能不存在β—(1—3)连接。
4、鼓槌石斛多糖体外抗肿瘤活性的初步研究。不同剂量的鼓槌石斛多糖作用于体外培养的肺腺癌细胞(SPC—A—1)24h,48h,72h,通过CCK—8细胞生长抑制试剂盒检测不同组分多糖对肺腺癌细胞生长的影响。结果表明:4个组分多糖在一定浓度范围和时间条件下有抑瘤作用,呈现剂量效应和时间效应关系;此外,DCCPⅠ—a和DCCP—Ⅱ的抑瘤水平明显高于CDCP。