【摘 要】
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目的:自噬是细胞的一种正常生理活动,也可在细胞遭受各种刺激时激活,起到保护细胞或是加重细胞损伤的作用。本课题从细胞水平分别探讨在心肌细胞缺氧期和复氧期,自噬活性的改变及其与Parkin依赖的线粒体自噬信号通路的关系。方法:本实验研究对象为大鼠H9c2心肌细胞株,构建缺氧（anoxia,A）损伤模型,缺氧/复氧（anoxia/reoxygenation,A/R）损伤模型。我们将细胞随机分为3组,正常
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（No 81460495,81660601）; 南昌大学研究生创新基金资助项目（No cx2016381）
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目的:自噬是细胞的一种正常生理活动,也可在细胞遭受各种刺激时激活,起到保护细胞或是加重细胞损伤的作用。本课题从细胞水平分别探讨在心肌细胞缺氧期和复氧期,自噬活性的改变及其与Parkin依赖的线粒体自噬信号通路的关系。方法:本实验研究对象为大鼠H9c2心肌细胞株,构建缺氧（anoxia,A）损伤模型,缺氧/复氧（anoxia/reoxygenation,A/R）损伤模型。我们将细胞随机分为3组,正常对照组（Control）、缺氧组（A）、缺氧/复氧组（A/R）,通过生化自动分析仪检测LDH、CK的活性,流式细胞仪测定活性氧（ROS）生成和线粒体膜电位（ΔΨm）水平,分光光度计法测定m PTP的开放,采用Real-time PCR技术和Western blot法分别检测自噬相关基因在m RNA及蛋白水平的表达,通过MDC染色检测自噬泡的形成,激光共聚焦显微镜检测Parkin在细胞内的亚定位。结果:1.缺氧后,心肌细胞LDH和CK活性增高,ROS生成略增加,ΔΨm下降。复氧后,LDH和CK进一步增高;ROS爆发,较C组和A组均明显增多;ΔΨm崩溃,m PTP开放。2.Real-time PCR及Western blot结果显示,A组与Control组相比,自噬标志性蛋白LC3和Beclin1均显著下调;VDAC1、PINK1和Parkin则表达增加。而A/R后,LC3和Beclin1表达则较A组上调;VDAC1、PINK1和Parkin表达进一步增加。3.MDC检测结果显示,A组较C组自噬泡数量减少,提示缺氧后细胞自噬活性下降;但是A/R组自噬泡的数量较C组和A组均明显增多,说明自噬活性显著增强。4.激光共聚焦显微镜检测Parkin在细胞内的亚定位,结果显示A组细胞Parkin主要存在于胞浆中,而A/R组细胞Parkin则移位至线粒体。结论:心肌细胞缺氧后自噬活性下降,细胞损伤加重;但再复氧后VDAC1显著上调,激活Parkin,促进其线粒体移位,自噬活性反而显著增强,细胞损伤程度进一步恶化。因此,我们推测缺氧期的自噬对于细胞来说应该是有利的,而复氧期过度增强的自噬水平则可能对心肌细胞造成不可逆性的损伤。
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