【摘 要】
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研究目的:虽然酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitor,TKI）是慢粒治疗的一线药物,但是随着临床上TKI药物的长期使用,有越来越多的临床耐药现象常有出现。干扰素α（IFN-α）作为第三代治疗慢性粒细胞白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）的药物。其临床药效并没有被TKI药物完全取代。依据文献报道,绝大多数的慢粒慢性期的病人在联合IFN-α和
【基金项目】
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国家自然基金（201781760539）
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研究目的:虽然酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitor,TKI）是慢粒治疗的一线药物,但是随着临床上TKI药物的长期使用,有越来越多的临床耐药现象常有出现。干扰素α（IFN-α）作为第三代治疗慢性粒细胞白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）的药物。其临床药效并没有被TKI药物完全取代。依据文献报道,绝大多数的慢粒慢性期的病人在联合IFN-α和TKI药物治疗后会得到一个更长的缓解。更有趣的研究得出,合用IFN-α可以加速TKI药物发挥药效。目前为止,IFN-α治疗CML生物分子机制并未获得全面而系统了解。收集三例初发的CML患者和三例对照的骨髓标本,Trizol处理标本后,提取RNA,检测RNA质量合格后,分别取等量的m RNA进行混合CML标本组和缺铁贫对照组,送公司进行RNA测序分析。通过对测序数据分析,我们发现BCR-ABL1阳性病人干扰素相关信号通路明显被抑制,其中干扰素诱导表达基因如干扰素诱导的四肽重复蛋白（interferon-induced tetrapeptide-repeat protein,IFIT）家族成员IFIT1、IFIT2、IFIT3都明显下调。其中,IFIT2在多个实体瘤与血液肿瘤中均具有抑制癌症发展的作用,也是三者中研究最为广泛的基因。结合团队已发表的文章,在人急性早幼粒细胞株（U937）内,上调IFIT2表达,可将抑制细胞生长,阻滞周期在G2/M期。欲探究IFIT2在慢粒当中可能发挥的作用机制。具体研究内容分为两个部分:1)过表达IFIT2在细胞生长和周期可能引起的改变;2)探索IFIT2是否通过影响BCR-ABL1信号通路蛋白,以达到抑制白血病肿瘤细胞增殖的作用。研究方法:1)应用RT-PCR技术检测24名CML病人与16名缺铁贫病人的骨髓细胞IFIT2转录水平。同时,在服用伊马替尼3个月和6个月后,检测6名CML病人骨髓细胞中IFIT2和BCR-ABL1的转录水平的变化。且慢粒细胞白血病骨髓象和临床症状有所改善。2)选用人CML细胞株K562为研究对象。构建了一株可以稳定表达IFIT2基因的K562细胞。通过免疫荧光和蛋白免疫印迹技术检测胞内IFIT2表达情况。诱导构建细胞株IFIT2过表达,观察细胞生长变化情况;通过流式细胞技术检测细胞周期变化。3)蛋白免疫印迹技术检测BCR-ABL1及其下游PI3K-AKT-m TOR等信号通路蛋白变化;检测P27周期蛋白及其相关蛋白是否发生改变。研究结果:1)RT-PCR结果显示缺铁贫病人表达IFIT2要明显高于慢粒初发的病人。病人服用伊马替尼并取得疗效后,IFIT2和BCR-ABL1的转录水平,分别随着服用的时间表达上升和下降。2)在过表达IFIT2细胞中,细胞计数结果表明生长速度明显减慢,流式细胞技术检测发现细胞周期阻滞在G1期;3)在过表达IFIT2细胞中,蛋白免疫印迹检测得到BCR-ABL1明显被下调。同时,PI3K-AKT-m TOR信号通路蛋白被抑制。细胞周期G1期调控蛋白c-Jun和p-c-Jun（ser63）被下调。IFIT2通过降解E3泛素连接酶复合物中的支架蛋白cullin1促进周期负调控蛋白p27的积累。结论:1)在BCR-ABL1阳性的CML患者中,骨髓白血病细胞IFIT2转录水平较缺铁贫明显下降。2)伊马替尼治疗CML后获得疗效,可下调BCR-ABL1和上调IFIT2基因。3)过表达IFIT2可下调c-Jun和上调P27细胞周期蛋白,以达到阻滞细胞于G1期作用,从而起到抑制K562细胞的增殖。4)IFIT2可以通过抑制BCR/ABL1-PI3K-AKT-m TOR信号通路蛋白的活性,以达到负相调节K562细胞周期的作用。
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