【摘 要】
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利用芽胞杆菌CTC菌株的S层蛋白（CTC）构建了细菌细胞表面展示系统.以CTC为运载蛋白,通过"三夹板"的融合方法,分别将乘客蛋白α-淀粉酶和金属硫蛋白定位在芽胞杆菌细胞表面,并且
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利用芽胞杆菌CTC菌株的S层蛋白（CTC）构建了细菌细胞表面展示系统.以CTC为运载蛋白,通过"三夹板"的融合方法,分别将乘客蛋白α-淀粉酶和金属硫蛋白定位在芽胞杆菌细胞表面,并且具有活性.对芽胞杆菌CTC菌株的S层蛋白基因进行序列分析,推测具有使S层蛋白锚定在细胞表面能力的SLH（S层蛋白同源序列）位于ctc的第130个～第663个bps,并选择了位于ctc基因slh其后257bps处的XbaI位点作为slh与乘客蛋白基因的连接位点.为了探讨利用ctc建立细胞表面展示系统的可行性.选择活性易于检测α-Amylase（α-淀粉酶）作为乘客蛋白,与载体蛋白CTC的SLH相融合.为了发挥S层细胞展示的应用潜力.又选择了具有 重金属离子吸附特性的MT（金属蛋白）作为乘客蛋白.通过与前类似的步骤,构建了含有融合基因slh/smtA的重组质粒Psm-304;与帮助质粒一起电转入无晶体突变株BMB171中,得到重组菌株SMC.还利用以ctc基因为基础构建的同源重组基因敲除质粒p869对CTC菌株所在亚种--幕虫亚种的标准菌株T02菌株T02菌株进行了其S层基因敲除的尝试.质粒p869电转入T02菌株,得到重组菌T02（p869）.经高温培养后,抗性筛选,初筛得到7个候选菌株.SDS-PAGE结果显示有一个候选菌株已无法在营养期产生S层蛋白：有两个候选菌株在芽胞期能超量表达S层的蛋白,而其130KD大小的杀虫晶体蛋白却发生了变化.
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