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乳酸菌被广泛应用于食品,医药及农业等各大领域,产生的胞外多糖对人体是有益处的。嗜热链球菌能够产生乳酸,属于乳酸菌,是链球菌属中唯一的益生菌。被应用于各大领域。它产生的多糖添加入酸奶中,不但增加了口感,更增加了粘度等。因而对于乳酸菌的开发,倍受世界各地科学家们的关注。但是,乳酸菌产胞外多糖的产量较低,这对于它的开发利用是很大的一个难度。研究人员从不同角度,对其进行了研究,通过改变调整它的生长时间,温度,PH,培养基等,来提高它的胞外多糖产量。本研究主要内容包括: ⑵以实验室保存的嗜热链球菌为出发菌株,利用化学诱变剂的方法进行诱变,通过单因子与复合因子等诱变方法的处理,最终选育出高产胞外多糖的乳酸菌菌株。通过不同浓度的单因子甲基磺酸乙酯(Ethyl methanesulfonate)诱变,当EMS浓度为0.02m/ml、作用60分钟时,选育出6株高产胞外多糖菌株,出发菌株产胞外多糖量为621mg/l,诱变高产菌株2-60-14产胞外多糖量为1625mg/l,其多糖产量为出发菌株的1.9倍。表明该菌株对于EMS诱变剂在低浓度,长时间处理下,得到的高产菌株回复突变力小且诱变效果显着。 ⑵用吖啶橙对乳酸菌进行诱变,当浓度为20μg/ml,致死率为40%,而在高浓度处理下,致死率不会增加,且突变效果也在逐渐降低。选育出12株胞外多糖产量高的菌株进行筛选。当出发菌株产胞外多糖量为897mg/l,选育出高产菌株编号为3-23的高产菌株1524.9 mg/l,其产胞外多糖的能力是原始菌株的1.7倍,且未出现回复突变。 ⑶用5.溴尿嘧啶(5-BU)对其进行诱变,从低浓度到高浓度的增加可看出,致死率有线性变化。在不同浓度下,筛选出15株产胞外多糖高的菌株,进行复筛。在5-BU浓度为5μg/ml下,出发菌株产胞外多糖量为983mg/l选育出高产菌株,其编号为5-18.,其产胞外多糖量为1572.8mg/l为出发菌株的1.6倍。 ⑷此为单一因子的诱变,同时,本实验还进行了复合因子的诱变处理。在单因子诱变的基础上,选择高产菌株的诱变时间和诱变浓度,进行了复合因子的诱变。在EMS于5-BU同时作用下,乳酸菌的高产菌株为用EMS作用40分钟时的突变菌株,比出发菌株提高了1.4倍。以及在EMS于吖啶橙同时作用下,乳酸菌的高产菌株为EMS作用60分钟时的突变菌株,比出发菌株提高1.93倍。 ⑸通过对这五株菌株的遗传培养,选育出高产菌株编号为60-22的复合诱变菌株。它比出发菌株的产量提高1.93倍。最终使试验得到了满意的效果。菌株对化学诱变剂有选择性,尤其对烷化剂EMS。从试验结果可以看出,复合诱变在低浓度长时间作用下更易得到高产菌株。这为我们今后的诱变试验打下基础。