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目的:体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,定向诱导、培养出听毛细胞祖细胞。方法:用贴壁法分离培养小鼠骨髓中的间充质干细胞。传至3-5代的骨髓间充质干细胞在DMEM/F12+N2+EGF+ bFGF培养基中培养5天,诱导细胞向神经干细胞方向分化,用免疫组化检测神经干细胞标记物Nestin阳性率;然后,在DMEM/F12+N2+IGF+EGF+RA培养基中培养18天进一步诱导细胞向听毛细胞方向分化,最后在培养基(DMEM/F12+N2)中单独培养7天,让细胞充分分化。并用RT-PCR检测听毛细胞标记物Math1和myosinVIIa的表达。结果:小而圆或纺锤样的骨髓间充质干细胞,在DMEM/F12+N2+EGF+bFGF中培养5天,细胞体积增大,有的有突起形成。在DMEM/F12+N2+IGF+EGF+RA中培养后细胞形态呈神经元样或上皮样。免疫组化:用DMEM/F12+N2+EGF+ bFGF的培养基中培养5天的细胞Nestin表达阳性率高于未诱导细胞。RT-PCR:向听毛细胞方向诱导后的细胞能表达Math1和myosinVIIa,而未诱导细胞不表达。结论:骨髓间充质干细胞能够培养分化成神经干细胞,并可进一步定向诱导分化成听毛细胞祖细胞,可以作为感音神经性聋细胞移植治疗的材料。