蛋白质酰胺侧链15N同位素标记技术的探究与应用

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cxcsmile
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
近年来核磁技术已经发展成为一个遍及多门科学多个研究方向的重要分析手段,其在大分子蛋白质结构解析、蛋白质-蛋白质相互作用、药物筛选、生物体新陈代谢体系研究等领域发挥着举足轻重的作用。为了更加充分的拓展核磁技术的应用和解决核磁技术的瓶颈问题,多种技术被开发出来。在蛋白质结构与功能研究领域,分子量增大引起的核磁谱峰重叠及线宽增加无疑是限制核磁技术在蛋白质研究中发展与应用的一大难题。为解决此问题,我们主要集中中于蛋白质选择性标记技术及顺磁核磁共振技术的开发与研究。蛋白质选择性标记技术可有效的解决谱峰重叠的问题,而顺磁核磁共振技术可以通过有限的数据提供长程距离信息。   本研究主要对蛋白质酰胺侧链进行15N选择性标记,简化核磁谱图,减少谱峰重叠。首先,我们在前人的基础上,以泛素蛋白-ubiquitin为模板蛋白,对蛋白质天门冬酰胺侧链进行单独15N标记,并对标记条件进行优化。通过对有可能影响天门冬酰胺生物合成途径的多个因素----如谷氨酰胺浓度、天门冬氨酸浓度、15NH4Cl浓度的筛选,我们完成了对将近98%的天门冬酰胺侧链进行15N标记。另外,我们对谷氨酰胺、天门冬酰胺侧链共同标记条件进行优化,提高其标记比例,最终完成对将近98%的谷氨酰胺与天门冬酰胺侧链进行15N标记。最后,我们将蛋白质酰胺侧链15N标记技术与顺磁核磁共振技术----PRE、PCS结合应用,我们发现通过蛋白质酰胺侧链的PCS可以准确拟合金属离子位置,且蛋白质酰胺侧链的PRE可与其同金属离子的距离高度一致,这充分证明了蛋白质酰胺侧链标记技术与顺磁核磁共振技术联合应用的可行性,同时也为酰胺侧链标记今后在药物筛选、蛋白相互作用、大分子量蛋白质结构与功能研究等领域的应用奠定了坚实的基础。
其他文献
社团简介坐落在明山秀水之中的百年名校湖北荆门龙泉中学,始终以全面培养学生素质为己任,课内打基础,课外求发展。课余,文学爱好者们在导师的引领下,或漫步于文明湖畔,触景生
政绩本来是干部德才素质的综合反映。但是,也有少数领导干部陷入了“政绩误区”,如有的脱离实际,违背经济规律,乱铺摊子,搞“泡沫政绩”;有的信奉“不怕群众不满意,就怕领导
固相合成技术已经广泛地应用于合成生物大分子,比如多肽和寡核苷酸。其中一个关键因素是选择合适的聚合物载体,虽然近些年开发了多种固相载体,但是这些载体有其自身的缺点,没有一
国家发展改革委近日正式批复《北戴河生命健康产业创新示范区发展总体规划(2016-2030年)》(以下简称《规划》)。北戴河生命健康产业创新示范区位于河北省秦皇岛市北戴河地区,
2002年6月18日,中央企业党建思想政治工作研究会在北京召开成立大会。中共中央政治局委员、国务院副总理、中央企业工委书记吴邦国对成立中央企业党建思想政治工作研究会,作
氧化石墨烯(GO)是由石墨氧化剥离所得,是合成石墨烯时不经过肼还原直接机械剥离的产物。GO是一种新型的碳纳米材料,具有大的比表面积、良好的导电性、高的机械强度和热稳定性。
近年来,具有刺激响应性和生物相容性的介孔二氧化硅纳米粒子在药物的控制释放领域引起了很多研究者的兴趣,它们具有许多优点,比如:(1)有序均一的孔隙网络;(2)孔体积大;(3)比表面
1999年以来,南平市委、市政府组织实施了“高位嫁接,重心下移”的一系列政策措施,把相对较高层次、较高素质人才群体充实到农村一线,进入经济建设和社会发展主战场,党的先进
随着科技的日新月异,高速机械的应用越来越广泛,振动和噪声的污染日益加剧,无可避免地对机械的寿命和人类的活动造成了严重的影响,成为了社会的一大公害,探讨新材料的制备工艺和研
本研究旨在对马来西亚迄今为止最大的一宗跨宗教纷争事件——“阿拉”纷争的相关报道作出框架分析。研究对比了中文报纸、英文报纸和马来语报纸对此次纷争的报道,找出导致框