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目的在高脂环境下,用不同浓度的槲皮素干预大鼠肝细胞,测定干预后细胞内外胆固醇含量的变化情况,同时检测细胞活力,选定适宜的干预剂量;从细胞和分子水平上分析槲皮素对胆固醇代谢的具体作用,揭示槲皮素可能的作用机制,为充分认识植物化学物作用的多样性以及合理应用提供理论和实验依据。方法1.高脂血清的制备：灌胃给予雄性Wistar大鼠高脂乳剂一周,建立大鼠高脂血症模型,实验结束后,无菌条件下眼眶取血,离心取血清。2.高脂培养模型的建立：测定正常组和高脂组血清中胆固醇相关指标,判定高脂血症模型是否建立成功,然后用10%高脂血清加90%培养液配制成高脂血清培养液。3.槲皮素适宜干预浓度的探讨：首先采用含0、5、10和20μmol/L槲皮素的10%胎牛血清培养液干预培养BRL肝细胞24h,换液,用含0、5、10和20μmol/L槲皮素的10%高脂血清培养液干预培养BRL肝细胞48h,实验结束后进行细胞活力和细胞凋亡相关指标的检测,然后测定培养液和细胞内胆固醇相关指标的变化。4.在上述实验的基础上,选定最适干预浓度,实验方法同上,进一步研究槲皮素对BRL肝细胞胆固醇代谢影响,实验结束时测定细胞内调节胆固醇代谢的蛋白,以及关键酶的表达与活性。结果1.灌胃给予雄性Wistar大鼠高脂乳剂一周后,无菌条件下取血,离心取血清,血清中TC、FCH和LDL-C含量与灌胃前比较均显著升高。2.分别用含10%正常血清和10%高脂血清培养液培养肝细胞24h后,测定培养液中胆固醇相关指标,发现高脂培养液中TC、FCH和LDL-C均显著高于正常培养液；用10%正常血清培养肝细胞24h后,换液为10%高脂血清继续培养48h,发现高脂血清干预后细胞内的TC和FCH含量均显著升高。3.在高脂环境下,用不同浓度的槲皮素干预大鼠肝细胞后,MTT检测结果发现与其他三组相比20μmol/L槲皮素可使细胞活力显著下降,且随着槲皮素浓度的升高,AST和ALT均有上升趋势,但LDH无明显变化,可能是相关指标不敏感。细胞凋亡检测结果显示随着槲皮素浓度的升高,细胞凋亡率升高,且20μmol/L槲皮素组与0、5μmol/L组有显著差异,所以我最终选择10μmol/L槲皮素为干预剂量。4.在高脂环境下,用不同浓度的槲皮素干预BRL肝细胞后,实验结果发现随着槲皮素浓度的升高,培养液中的TC、FCH和CE浓度均下降,LDL-C浓度变化无统计学意义。与Oμmol/L槲皮素相比较,10和20μmol/L槲皮素可显著降低培养液中TC、FCH和CE含量；同时随着槲皮素浓度的升高细胞内TC和FCH含量虽有一定的下降趋势,但无统计学差异,CE含量无明显变化。5.与对照组相比较,lOμmol/L槲皮素显著降低HMGCR活性及其mRNA和蛋白的表达,显著升高LDLR、SREBP-2、ABCA1和LXR a mRNA和蛋白的表达。结论在高脂环境下,10μmol/L槲皮素干预对BRL肝细胞胆固醇代谢有显著影响,槲皮素可以通过降低HMGCR mRNA、蛋白的表达和酶活性来抑制肝细胞胆固醇的合成；槲皮素可以通过促进肝细胞LDLR及其上游调控因子SREBP2 mRNA和蛋白的表达来促进肝细胞LDL-C的摄取;槲皮素可以通过促进肝细胞ABCA1及其上游调控因子LXR α mRNA和蛋白的表达来促进肝细胞内源性胆固醇的外排。