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该实验利用该课题组构建的表达LT突变体基因的质粒pLTR72(质粒的LT基因中编码第72位丙氨酸的密码子GCA被替换成为编码精氨酸的密码子AGA)和天然LT质粒pLT分别转化大肠杆菌JM101,接种于LB培养基中培养,然后裂解菌体,纯化蛋白LTR72和LT,用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况.结果表明,LB培养基可以表达质粒pLTR72和质粒pLT中的LT突变体基因及LT基因,并可将产物分泌到大肠杆菌胞质中,成为具有GM1结合活性的突变体LT和天然LT,而且二者在活性上无差异;将纯化蛋白LT和LTR72进行SDS-PAGE电泳,结果显示,纯化的突变体LT蛋白和天然LT蛋白的结构相似,都是由A、B二亚单位组成;在兔肠袢结扎试验中,天然LT的毒性最大,突变体LT72的毒性很小,接近于阴性对照的水平.将不同剂量的单纯LTR72接种于1日龄健康雏鸡,结果显示,接种100 μ g范围内对鸡安全可靠,无不良反应,单纯LTR72免疫后对ND HI抗体效价无影响,但能非特异性地刺激鸡体内淋巴细胞活性增强.通过用不同剂量LTR72协同疫苗免疫后检测ND抗体的水平,确定疫苗中LTR72的最佳用量为25 μ g.将LTR72与ND La Sota疫苗混合后进行雏鸡免疫试验,结果表明,无论是高母源抗体免疫组,还是低母源抗体免疫组,LTR72-ND疫苗组的HI抗体效价均明显高于单纯疫苗组(P<0.05);在高母源抗体时,LTR72-ND疫苗组的有效免疫期比单纯疫苗组延长1周,在低母源抗体时延长了2周.这些结果充分说明,无论是雏鸡在高母源抗体时还是在低母源抗体时,LTR72对ND La Sota疫苗均具有明显的免疫增强作用.