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本论文主要分析人体内的内源性儿茶酚胺类酸性代谢物。高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术在生物样本检测中发挥着重要的作用,尤其是近年来所发展的高选择性、高灵敏度多反应监测(MRM)技术更是被广泛应用。人体内儿茶酚胺类酸性代谢物含量相对较低,而且易被氧化。因此,结合质谱技术,建立并发展一种可靠、准确的分析方法用于对这些酸性代谢物进行检测具有重要意义。
本文基于新型的标记试剂4,6-二甲氧基-2-甲砜基嘧啶,通过一步简单的衍生化反应,应用高效液相色谱-串联质谱发展了一种灵敏的、准确的方法用于检测儿茶酚胺类酸性代谢物——高香草酸(Homovanillic acid,HVA)、香草扁桃酸(Vanillymandelic acid,VMA)、3,4-二羟基苯乙酸(3,4-dihydroxyphenylacetie acid,DOPAC)和3,4-二羟基苦仁酸(3,4-dihydroxymandelic acid,DOMA)。将大体积4,6-二甲氧基嘧啶基团引入到这些酸性代谢物的结构中,使这类酸性代谢物转化为稳定的4,6-二甲氧基嘧啶的衍生物,随后运用HPLC-ESI-MS/MS中的多反应监测方式特征性地去分析这些衍生后的代谢物,HVA、VMA、DOPAC在10 ng/mL到1000 ng/mL范围内和DOMA在5 ng/mL到1000ng/mL范围内均有良好的线性关系,它们的最低检测限在1~5 ng/mL之间。每个分析物的回收率都在100%~105%之间;其中,日内的精密度均低于7.6%,日间的精密度均低于5.3%,随后将已建立的分析方法应用到正常人尿样中进行分析检测,测定了正常人尿样中所含的这四种酸性代谢物的含量。