论文部分内容阅读
本文对Tctex5基因在小鼠胚胎发育过程中的功能进行了研究。TCTEX5蛋白是一个由131个氨基酸组成的小蛋白。TCTEX5蛋白是蛋白去磷酸化酶PP1的抑制亚基11,其定义为t复合物睾丸表达的因子5。所谓t复合物是17号染色体上的突变体“t单倍体”的对应野生型区域。在不育品系t突变小鼠,PP1与Tctex5的绑定位点发生了突变。由Tctex5、PPP1R7、Sds22和动力蛋白在睾丸中组成的复合物或许阻止了Tctex5的蛋白水解,继而阻止了生殖细胞的凋亡。总之,之前的研究都是将Tctex5作为导致不育的候选基因来研究.为了系统研究Tctex5在体内的功能,我们使用了同源重组的方法得到了Tctex5基因打靶的嵌合体小鼠。使用嵌合体公鼠与野生型ICR母鼠合笼后,得到了F1代杂合子小鼠。杂合子公鼠和母鼠合笼后产生的F2代仔鼠出生后使用PCR的方法进行检测,没有发现Tctex5基因敲除的纯合子小鼠。而且杂合子与野生型在F2代的比率也小于2:1。这表明缺乏Tctex5蛋白的小鼠胚胎在出生前出现死亡。通过对植入前Tctex5基因打靶胚胎的培养发现,Tctex5敲除没有影响到植入前胚胎的发育。对于5.5天-13.5天的F1代怀孕杂合子鼠(与杂合子公鼠交配)的解剖发现,早在胎龄6.5天,纯合子的胚胎已经死亡并有部分被吸收。石蜡切片的HE染色进一步证实了这一结论。以上结果表明Tctex5的缺失并不影响小鼠胚胎的植入,但是对于植入后胚胎的发育却是极为关键的。Tctex5在野生型卵母细胞和植入前胚胎中的转录水平是一个动态的过程。卵母细胞中的Tctex5 mRNA水平远远高于任一时期胚胎的Tctex5转录水平。这表明Tctex5主要是在卵母细胞时期储存了大量的mRNA.受精后Tctex5的转录水平逐渐降低然而到桑葚胚期又略有升高。免疫组化实验表明Tctex5蛋白定位在植入前胚胎的核中。并且我们发现在囊胚期Tctex5可能特异地在内细胞团细胞中表达。这些结果可能预示Tctex5蛋白的缺失可能最终导致内细胞团的缺陷,从而导致胚胎的死亡。ES建系实验还表明,相对于野生型囊胚的建系效率,Tctex5杂合子交配后所得囊胚的建系效率要低的多,而且所建成的ES细胞系没有检测到Tctex5基因敲除的纯合干细胞系。综上所述,Tctex5是小鼠胚胎发育过程中不可或缺的重要基因,并且有可能对胚胎干细胞多能性的维持具有重要作用。