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红厚壳(Calophyllum.InophyllumL.)又名海棠果,为藤黄科红厚壳属多年生植物,在我国的海南岛和东南亚、印度、非洲等热带地区都有分布,具有药用价值。目前,红厚壳大都处于野生或半野生状态,产量低,依靠野生的红厚壳已远远满足不了市场及研究的需要。因此,建立红厚壳种苗繁育体系,对进一步保护、开发和利用红厚壳资源有重要的意义和应用前景。
本研究采用组织培养的方法,建立海南红厚壳芽再生体系,同时摸索诱导愈伤组织的最适培养基,为利用生物工程技术生产红厚壳药用成分奠定基础。研究获得了以下主要结果:
1.红厚壳种子无菌萌发后,最合适诱导愈伤组织形成的外植体是20d绿苗的茎尖或带节茎段。愈伤组织诱导效果最好的培养基是:MS+1.0mg/LNAA+0.5mg/LTDZ和MS+1.0mg/LNAA+2.0mg/L2,4-D+0.2mg/LTDZ。愈伤组织诱导以及外植体褐化均与培养基中的无机盐浓度有关,在相同的激素配比条件下,在MS培养基上的愈伤组织诱导率最高。培养基中不加蔗糖、蔗糖浓度过低会导致红厚壳外植体死亡。随着蔗糖浓度增加,红厚壳外植体愈伤组织诱导率呈增加趋势,但褐化程度也增加,愈伤组织质地更致密,呈浅红色。
2.NAA与TDZ的组合能有效诱导红厚壳不定芽的伸长,而6-BA是导致红厚壳畸形芽出现的一个重要因素,不利于芽的伸长生长,但6-BA能诱导红厚壳不定芽的增殖。最适合红厚壳腋芽萌发与生长的蔗糖浓度是40g/L,进一步升高蔗糖浓度,长芽率下降。施加葡萄糖导致红厚壳腋芽形成畸形芽。本实验中腋芽萌发和伸长最适培养基为MS+NAA1.0+TDZ0.5,外植体在此培养基上培养21d,可转入无激素培养基以降低畸形芽率。
3.IBA不利于红厚壳芽诱导生根,最适合红厚壳不定芽诱导生根的NAA为1.0mg/L,最适活性炭浓度为1.0g/L。两步生根法有效地促进红厚壳根的诱导与生长。